[发明专利]一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学检测领域，尤其涉及一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法。

背景技术

免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。抗原借助表面的抗原决定簇与抗体分子超变区在空间构型上的互补，发生特异性结合。同一抗原分子可具有多种不同的抗原决定簇，若两种不同的抗原分子具有一个或多个相同的抗原决定簇，则与抗体反应时可出现交叉反应。

抗原抗体结合除以空间构型互补外，主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子表面的非共价方式结合，结合后形成的复合物在一定条件下可发生解离，回复抗原抗体的游离状态。解离后的抗原和抗体仍保持原有的性质。抗原抗体复合物解离度在很大程度上取决于特异性抗体超变区与相应抗原决定簇三维空间构型的互补程度，互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易发生解离。

而小分子抗原或半抗原因抗原表位少，不能用夹心法进行测定，只能采用竞争法检测模式。而现有的检测小分子抗原的方法主要有酶联免疫吸附试验、免疫层析试验、仪器分析等方法。酶联免疫吸附试验因其特异、灵敏、检测成本低而得到广泛应用。免疫层析试验虽然简便易用，但因其准确性不高，同样限制了它的应用。仪器分析法准确、可靠，但因需要用到昂贵的设备和专业的技术人员，限制了它的应用，多用于确认检测。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法，旨在解决现有免疫分析方法灵敏性偏低、不适于高灵敏检测的问题。

本发明的技术方案如下：

一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法，其中，所述提高竞争免疫分析灵敏性的方法步骤如下：

预反应：将待检测物质与受体/抗体进行预反应；

再反应：将预反应的反应产物与位于固相上的参与竞争反应的第二分子进行反应；

所述再反应过程中将预反应的反应产物分成一份或多份，分别与所述第二分子进行反应。

所述的提高竞争免疫分析灵敏性的方法，其中，所述再反应过程中，所述预反应的反应产物是以流动的方式流过所述固相表面与所述第二分子反应。

所述的提高竞争免疫分析灵敏性的方法，其中，所述再反应过程中，每一份预反应的反应产物与所述第二分子的反应时间在20min以内。

所述的提高竞争免疫分析灵敏性的方法，其中，所述再反应过程中，每一份预反应的反应产物与所述第二分子的反应时间在5min以内。

所述的提高竞争免疫分析灵敏性的方法，其中，每一份所述预反应的反应产物与所述第二分子进行反应后，将反应后的液体去除。

所述的提高竞争免疫分析灵敏性的方法，其中，所述预反应过程的反应温度为0℃-65℃，反应时间为0-3小时。

所述的提高竞争免疫分析灵敏性的方法，其中，所述预反应过程的反应时间为30min。

所述的提高竞争免疫分析灵敏性的方法，其中，所述第二分子是指参与竞争反应的小分子与载体蛋白形成的偶联物。

有益效果：本发明从反应方式上着手，提供一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法，主要是将待检测的小分子物质首先与抗体/受体发生充分反应，然后再与位于固相上的参与竞争反应的第二分子在短时间内反应，这样能大大提高了免疫分析方法的灵敏度。本发明方法操作简单，成本低，不需要用到昂贵的设备和专业的技术人员，而且灵敏性高，适用于多种免疫分析方法。

具体实施方式

本发明提供一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

灵敏性偏低、不适于高灵敏检测是免疫学检测普遍存在的问题，因而人们开发出了多种免疫学检测信号放大方法，如：酶标记、稀土荧光标记、放射物标记等方式提高检测信号。而本发明从反应方式上着手，提供一种提高竞争免疫分析灵敏性的方法，主要是将待检测的小分子物质首先与抗体/受体发生充分反应，然后再与位于固相上的参与竞争反应的另一种分子在短时间内反应，这样能大大提高了免疫分析方法的灵敏度。

具体的，所述提高竞争免疫分析灵敏性的方法步骤如下：

预反应：将待检测物质与受体/抗体进行预反应；

再反应：将预反应的反应产物与位于固相上的参与竞争反应的第二分子进行反应。