[发明专利]一种Microdochium bolleyi F10菌株菌剂及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域，更具体涉及一种用于小麦胞囊线虫病生物防治的菌株Microdochium bolleyi F10，同时还涉及一种生防菌Microdochium bolleyi F10菌株菌剂的制备方法，还涉及一种Microdochium bolleyi F10菌株在制备治疗或预防小麦胞囊线虫病药物中的应用。 

背景技术

小麦是我国乃至世界分布最广的粮食作物，栽培面积居粮食作物之冠。由燕麦胞囊线虫（Heterodera avenae）引致的小麦胞囊线虫病，是当前对小麦生产威胁性极大的危险性病害，严重影响小麦的品质和产量。我国首次发现于1989年，现已知在湖北、河南、河北、青海、山西、安徽、江苏等省均有发生，危害面积已超过300万hm²，并呈逐渐上升之势，一般减产20%～30%，严重时达到70%，甚至绝收。该病害属于土传病害，一旦发生很难根治，目前绝大部分小麦品种都不具有抗线虫抗性。防治效果较好的化学农药基本都属于高毒农药，毒性高，对环境污染严重。国外学者对线虫的生物防治研究多集中于根结线虫，并成功研制出相应的生物制剂，鲜有报道关于小麦胞囊线虫的生物防治方面的研究。本发明报道一株对小麦胞囊线虫病有显著防治效果的菌株Microdochium bolleyi F10及其在防治小麦胞囊线虫病中的应用。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，是在于提供了一种生防菌Microdochium bolle yi F10，分离筛选的一种对小麦胞囊线虫病具有显著寄生作用的生防菌株Microdochium bol leyi F10菌株，使用该菌株制备的菌剂防治田间小麦胞囊线虫病，防治效果可以达到41%。使用微生物菌剂防治植物病害，减弱了化学药剂对环境的破坏以及对人类身体健康的影响，非常有效的提高了防治效率，可以实现农业、人类和环境的和谐、可持续发展。 

本发明的另一个目的是在于提供了一种生防菌Microdochium bolleyi F10菌株菌剂的制备方法，方法易行，操作简便，原材料来源广，制备过程简单，产量高，分生孢子产量可以达到3.2×10⁷/g干培养料；制备工艺可以满足规模化生产，以实现大田病害防治的需求。 

本发明的再一个目的是在于提供了一种生防菌Microdochium bolleyi F10在制备治疗或预防小麦胞囊线虫病药物中的应用，小麦播种时随麦种撒于播种沟中，按每亩600g制备的菌剂拌细土撒施，进行土壤处理，可以获得理想的发病效果；其优点在于省时省工，无需在小麦生长季节进行施药处理。 

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术方案： 

一种生防菌Microdochium bolleyi F10菌株的制备方法，其步骤如下： 

从湖北省襄樊地区感染小麦胞囊线虫的病土中分离线虫胞囊，将胞囊在70%乙醇（体积比）中表面消毒1-3min，然后无菌水中浸洗1-3min，置于保湿的无菌培养皿中24-26℃下培养4-6d。将胞囊中长出的真菌菌丝在PDA平板上进行单孢纯化培养；根据形态学特征和ITS DNA序列进行鉴定。获得了一种Microdochium bolleyi F10菌株，本发明自湖北省襄樊地区感染小麦胞囊线虫病的土壤中采获的胞囊上分离筛选获得一种适用于小麦胞囊线虫病防治的生防真菌Microdochium bolleyi菌株F10，该菌株于2012年5月7日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心（英文简称CCTCC）保藏，Microdochium bolleyi F10 CCTCC NO：M2012159。其ITS rDNA序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。 

该菌株在PDA培养基上PDA平板3d可以产生分生孢子，孢子梗极短，分生孢子单细胞，无色长椭圆形。培养15d后可以产生灰色的厚垣孢子，适宜的生长温度为20-25℃，适宜的生长pH值为5-7，适宜的碳氮源分别是淀粉和果糖及硝酸钾和蛋白胨，对小麦胞囊线虫胞囊较有强的寄生能力，其分生孢子悬浮液对小麦幼根的生长和发育没有显著的影响。 

一种生防菌Microdochium bolleyi F10菌株菌剂的制备方法，其步骤如下：