[发明专利]扩张性心肌病易感性检测试剂盒（CTLA4等基因）

权利要求书

1.一种筛查扩张性心肌病高危人群的基因无创检测试剂盒，其特征在于：检测 CTLA4基因上A49G（rs231775）、TNF-α基因上G-308A (rs1800629)、TNF-β基因上A252G rs909253)的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物与DNA测序引物、Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、SAP酶、ExoI酶、BigDye mix、EDTA溶液、70%乙醇溶液、100%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH₂O等。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的特异性引物对是指针对 CTLA4基因上A49G（rs231775）、TNF-α基因上G-308A (rs1800629)、TNF-β基因上A252G rs909253)的3个单核苷酸多态性位点，能特异性扩增出包含这3个SNPs位点的DNA片段的引物对。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的DNA测序引物是针对 CTLA4基因上A49G（rs231775）、TNF-α基因上G-308A (rs1800629)、TNF-β基因上A252G rs909253)的3个单核苷酸多态性位点而设计，能通过DNA测序技术特异性检测出上述3个SNPs位点基因型的DNA测序引物。

4.根据权利要求1所示的试剂盒，其特征在于，所含的3对特异性引物序列如下：

（1）CTLA4（A49G）正向引物：5'CTGAACACCGCTCCCATAAA3'

CTLA4（A49G）反向引物：5' GAATACAGAGCCAGCCAAGC3'

（2）TNF-α（G-308A）正向引物：5'GGAAGCCAAGACTGAAACCA3'

TNF-α（G-308A）反向引物：5'TCATCTGGAGGAAGCGGTAG3'

（3）TNF-β (A252G) 正向引物：5'CAGAAGGAGGAGGTGTAGGGT3'

     TNF-β (A252G) 反向引物：5'TTCGTGCTTTGGACTACCG3'。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所含的3条DNA测序引物序列如下：

（1）CTLA4（A49G）测序引物：5'CTGAACACCGCTCCCATAAA3'

（2）TNF-α（G-308A）测序引物：5'GGAAGCCAAGACTGAAACCA3'

（3）TNF-β (A252G) 测序引物：5' CAGAAGGAGGAGGTGTAGGGT3'。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂盒的组分和含量包括：

（1）PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul，25mM dNTP混合液0.2ul，5U／ul Taq DNA聚合酶 0.125ul，20uM特异性引物对，每条引物各0.25ul，ddH₂O 19.175ul；

（2）PCR产物纯化体系：1 U／ul SAP酶0.75ul，10 U／ul ExoI酶0.375ul，ddH₂O 3.875ul；

（3）测序反应体系：25% BigDye mix1ul，3.2uM DNA测序引物1ul，125mM EDTA溶液1ul，100%乙醇溶液15ul，70%乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH₂O 2ul。

7.本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。