[发明专利]全人源抗人催乳素受体单链抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程抗体技术和生物制品领域，具体涉及一种特异性全人源抗人催乳素受体单链抗体及其应用。

背景技术

乳腺癌是严重威胁女性健康的重要疾病。全世界每年约有120万妇女发生乳腺癌，有50万妇女死于乳腺癌。在我国，乳腺癌已成为女性最常见的恶性肿瘤之一，居女性恶性肿瘤死亡率的首位。据近期的调查报告显示，乳腺癌已是上升幅度最快的恶性肿瘤之一，在过去30年中，上升比例高达96%，仅次于肺癌。迄今，乳腺癌的病因学尚不十分清楚，遗传、免疫、激素与各种环境因素相互作用，可能共同参与乳腺细胞癌变演进过程。近年来，随着对肿瘤信号转导途径研究的不断深入，分子靶向生物治疗已成为肿瘤治疗的一种新模式。筛选新型抗肿瘤靶标和设计组合靶标并探索其治疗作用及分子机制已成为现今乳腺癌生物治疗的重要研究方向。

催乳素（prolactin,PRL）和催乳素受体（prolactin receptor,PRLR）是乳腺细胞中一类与细胞生长、分化密切相关的信号分子。PRL不仅通过内分泌机制影响乳腺细胞生长、发育和分化，还可以作为乳腺所产生、释放的细胞因子，以旁分泌和自分泌方式调节乳腺细胞的反应。PRL作用的信号转导机制是通过细胞膜上的PRLR来完成，PRL和PRLR结合，使JAK2磷酸化而激活，诱导受体细胞内远侧酪氨酸磷酸化，并激活STAT蛋白，激活后的STAT转移入细胞核内，激活靶基因的转录，产生其生物学效应。另外，PRL信号也通过PRLR活化PI3K和MAPK信号通路，增加细胞周期素D1的表达，并促进乳腺癌细胞生长。研究表明，在乳腺癌组织中PRL表达水平明显高于正常乳腺组织和增生性上皮组织，与正常邻近肿瘤组织相比，70-95%原发性乳腺癌组织中PRLR表达水平也显著升高。在乳腺癌啮齿类动物模型中，PRL过表达与PRLR的激活、扩增增加了乳腺肿瘤发生率和生长率。PRL也能够与其它激素，如雌激素、生长激素等协同作用，促进乳腺癌细胞的增殖。使用PRLR拮抗剂，可竞争性地抑制内源性PRL与PRLR结合，从而干扰了PRLR的信号转导，抑制了乳腺癌细胞的增殖，促进细胞分化、凋亡和抗血管新生的作用。前期研究也表明，靶向PRLR的siRNA能够特异地抑制PRLR的表达进而影响PRL/PRLR结合引起的下游信号通路，部分抑制了乳腺癌细胞的增殖。以上研究结果，提示PRLR是乳腺癌生物治疗中的一个值得关注的候选抗肿瘤靶标。有效拮抗PRLR与PRL的结合或利用高表达的PRLR信号转导途径，为乳腺癌的生物免疫治疗提供了一种新的策略。

噬菌体抗体库技术是一种将抗体基因表达产物和亲和选择相结合的技术，以改建过的噬菌体为载体，利用DNA重组技术将待选抗体基因片段定向插入噬菌体外壳蛋白基因区，外源DNA片段的表达产物与噬菌体衣壳蛋白形成融合蛋白，展示在噬菌体表面，并保持一定的空间构象，再利用抗原抗体分子间的亲和力进行筛选，表达特异性的噬菌体抗体，同时测定外源DNA的序列即可得知其表达产物的氨基酸序列。由于噬菌体表达的scFv抗体分子量较小，仅为完整抗体分子的六分之一，且具有较好的血管或组织屏障穿透性、能够迅速到达靶抗原部位、半衰期短、分子结构稳定、不形成寡聚体、易从血液循环系统中清除，不含Fc段，减少了与体内Fc受体结合而带来的不利影响等优势，同时人源噬菌体抗体完全避免了HAMA（Human Anti-Mouse Antibody）反应，在一定程度上可消除单抗的免疫原性，使其在临床上可反复地应用，从而达到治疗效果而不至于引起人对其产生免疫反应，已广泛地应用于分子生物学及免疫学、药理学等医学领域，是目前研究的热点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是在于为人乳腺癌的生物免疫治疗提出新的方向，提供一种以人催乳素受体（PRLR）为靶标的抗乳腺癌全人源化单链抗体（Single chain fragment variable,scFv）HscFv 918。

本发明还要解决的技术问题是提供编码上述特异性抗人PRLR单链抗体HscFv 918的基因。

本发明最后要解决的技术问题是提供上述特异性抗人PRLR单链抗体HscFv918在制备治疗人乳腺癌生物免疫制剂中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种全人源抗人催乳素受体单链抗体，它是一株特异性的能够与人催乳素受体结合的单链抗体，它的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

上述全人源抗人催乳素受体单链抗体的编码基因也属于本发明的保护范围。

优选的是上述抗体的编码基因如SEQ ID No.1所示。