[发明专利]一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞的应用。

背景技术

越来越多的证据表明肿瘤干细胞在肿瘤免疫逃逸、抵抗放、化疗和复发转移中起到了至关重要作用，因此治疗肿瘤需要创建有效靶向杀灭肿瘤干细胞的新策略才有可能根治肿瘤，靶向肿瘤干细胞的免疫治疗在单克隆抗体和干细胞疫苗研究方面已经开展了积极的探索。到目前为止，所发现的肿瘤干细胞特异性标志物非常稀少，而CD133则是所发现肿瘤干细胞中最常见的标志物之一，在脑瘤、白血病、黑色素瘤、肾癌、大肠癌、胰腺癌、肺癌、肝癌和卵巢癌等多种肿瘤干细胞中存在，它的高表达与肿瘤病人的低生存率密切相关。

肿瘤过继免疫治疗中，细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer，CIK）作为新一代细胞所兼具的T淋巴细胞强大的杀瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤的特征,在临床取得了很大的进展，但是治疗效果仍然有限，其原因是CIK细胞缺乏特异性靶向杀伤肿瘤干细胞的作用。

为了靶向消灭肿瘤干细胞，由此本发明选择CD133作为针对CD133阳性肿瘤干细胞治疗研究的新靶点，构建了靶向CD133靶点的抗CD3/抗CD133双特异性抗体(bispecific antibody，BsAb)，并且将所制备的抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载到CIK细胞表面，使其双抗体与CIK细胞融为一体发挥靶向杀伤CD133阳性肿瘤细胞的作用。

发明内容

本发明的目的在于提出装备抗CD3/抗CD133双特异性抗体的CIK细胞的应用。

为了完成本发明的目的，采用的技术方案为：

本发明涉及一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞在制备治疗靶向杀伤高表达CD133的癌细胞的制剂中的应用。

本发明还涉及一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞在制备治疗靶向杀伤高表达CD133的肿瘤干细胞的制剂中的应用。

本发明还涉及一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞在制备抑制肿瘤生长的制剂中的应用。

本发明还涉及一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞在制备降低癌细胞中的S100P基因表达的药物中的应用。

本发明还涉及一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞在制备增加癌细胞中的STAT1基因表达的药物中的应用。

其中，本发明中的癌细胞包括胰腺癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、胶质瘤细胞、前列腺癌细胞、结直肠癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞。

本发明还涉及一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞在制备增加效应细胞IFN-γ细胞因子分泌的药物中的应用。

本发明的双抗及双抗装备的CIK细胞的制备方法为：

（1）取鼠抗人CD3单克隆抗体(1mg)溶于5倍摩尔浓度的交联剂Traut's试剂，15～25℃下作用1～2小时；用PD-10柱过滤，除去未交联的单克隆抗体；

（2）取鼠抗人CD133/1单克隆抗体(1mg)溶于4倍摩尔浓度的交联剂Sulfo-SMCC，15～25℃下作用1～2小时；用PD-10柱过滤，除去未交联的单克隆抗体；

（3）将步骤（1）步骤（2）得到的交联后的单克隆抗体混合，1～4℃下作用12～18小时。本发明还涉及一种抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞。

该抗CD3/抗CD133双特异性抗体装载的CIK细胞的制备方法，包括以下步骤：

（1）CIK细胞的培养：

取健康人外周静脉血10ml，肝素抗凝，用生理盐水1：1稀释后，加至淋巴细胞分离液上层，离心收集单个核细胞，用含5%胎牛血清的RPMI1640培养液调整细胞密度为2×10⁵个/ml，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养12～24h，然后加入rhIL-1α100U/ml、鼠抗人CD3McAb50ng/ml，rhIL-21000U/ml，每两天添加培养液和补充rhIL-21000U/ml，在培养第14天，检查CD3、CD4、CD8和CD56，收获CIK细胞；

（2）CIK细胞表型的检测：