[发明专利]中试规模黄芪渣虫草菌固体发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术应用领域，属于中药渣的利用，用工业上经“水提醇沉”提取黄芪多糖后剩余的黄芪渣作为中国拟青霉菌丝体固态发酵的基质，对其固态发酵工艺进行中试规模扩大培养的方法。

背景技术

中药残渣是药材加工为成药后剩余的大量含各种残余成分的药渣，含有许多可利用的有效成分，但它大多被废弃，给环境带来很大的压力。随着人们环保意识的增强和科技的发展，越来越多的研究致力于解决中药渣的残余问题，因此，出现了一些中药渣利用的新技术。申请号为201110351078.4，名为“利用维药(民族药)药渣固态发酵生产微生物饲料添加剂及酶制剂”的专利，其方法是以维药(民族药)药渣为主要原料，经适当配方选择作为发酵的基料，经固体发酵生产有益微生物及酶制剂。中药残渣的二次利用不仅解决了药渣对环境带来的压力，还使得药渣“变废为宝”，得到了充分利用。

黄芪为豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪等的根，黄芪含有大量的黄酮、生物碱、多糖、皂苷等活性成份。研究证明，黄芪多糖具有提高动物生产性能、增强机体免疫功能和抗病力等多方面的功能。在工业生产上，黄芪多糖的提取方法大多数停留在传统的“水提醇沉”，这种方法黄芪多糖得率比较低，产生大批量的残渣，而且这种方法使得黄芪中其他药用成分残留于残渣中。大批黄芪残渣如果处置不当就是一种浪费，怎样进行黄芪残渣的二次开发，使其“变废为宝”就成了一个新的研究课题。

本发明是采用中国拟青霉进行固体发酵，对工业黄芪渣进行二次利用的方法。经调查，申请的专利中已经有了对黄芪残渣二次利用的专利，申请号为200810151982.9，名为“利用黄芪渣发酵生产禽畜饲料添加剂的方法”的专利，其方法是以EM原露为菌种，黄芪药渣、麦麸和红糖混合物为培养基，进行固体发酵，生产禽畜饲料添加剂，它所用的菌种是EM原露，但本发明所用的菌种是真菌中国拟青霉。另外，申请号为200910114886.1，名为“一种真菌发酵物饲料添加剂及其制备方法和应用”的专利，其方法是利用从虫草中分离的一种蝙蝠蛾拟青霉，经诱变后得到的高产菌株作为菌种，对玉米粉和豆粕为固态发酵基质进行固态发酵，得到蝙蝠蛾拟青霉发酵物，这个发明中所用菌种虽然为真菌，但其不是对黄芪渣二次利用的发明。本发明的方法是将黄芪渣与营养物质和水进行适当配比，经灭菌制成发酵基质，将中国拟青霉种子液接种到发酵基质上进行固态发酵制得黄芪渣虫草发酵曲，再经过干燥、粉碎制成黄芪渣虫草发酵粉。

本发明主要侧重“黄芪渣虫草菌固体发酵”中试规模扩大培养。对于本实验的中试规模扩大培养，我们采用浅盘发酵法，浅盘的外形为长方型，规格为280×180×120毫米，由耐高温的聚丙烯材料构成，且设有无菌通气口。本方法特征在于发酵时可将发酵物放于浅盘中，然后将浅盘置于耐高温聚丙烯材料的塑料袋中，用棉塞将其于通气口处封口，进行灭菌，接种，发酵培养。

与传统固体发酵相比，本方法优点是：首先，本方法解决了在发酵期间通气容易带来污染的问题；其次，本方法能有效阻止发酵过程中水分的流失；再次，本实验可以循环培养，解决了发酵罐占用且阻碍下次发酵的问题，从而解决了固体发酵周期长带来的问题；最后本方法使用的浅盘成本低，可重复使用，降低了试验成本，便于实现工业化生产。

发明内容

本发明的目的是采用新型方法对黄芪渣虫草菌固体发酵进行中试规模的扩大培养，以达到规模生产的最终目的，为黄芪渣虫草菌固体发酵进行工业化生产提供依据，为大批工业黄芪渣的处理开辟一条新路。

本发明为中试规模黄芪渣虫草菌固体发酵的扩大培养，包括下述步骤：

1.将本发明使用的菌种中国拟青霉接种在PDA斜面上，于20℃下恒温培养7d，成熟后，用无菌水制成孢子悬浮液，待用。

所述PDA斜面培养基为马铃薯培养基，其具体制备方法为：去皮马铃薯200g切成小块，加水500mL煮沸30min，四成纱布过滤后，在滤汁中加入葡萄糖20g，琼脂20g并加热，琼脂完全溶解后补足水分至1000mL，分装，灭菌，备用。

2.将种子培养基经0.1Mp，121℃，20-30min灭菌。冷却后，按1-5％量接入步骤1中的孢子悬浮液，摇匀，于20℃、150r/min恒温振荡培养箱中培养3天，作为一级种子液，用于接种到固态基质上进行固态发酵。

所述种子培养液为：葡萄糖2％，蛋白胨1％，KH₂PO₃ 0.3％，MgSO₄ 0.15％，起始pH为自然pH。