[发明专利]一种具有抗肿瘤作用的大豆乳清蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及大豆乳清蛋白的制备方法，具体是一种具有抗肿瘤作用和增强免疫功能的大豆乳清蛋白的制备方法。 

背景技术

大豆乳清水是豆制品加工企业生产大豆分离蛋白、大豆浓缩蛋白和豆制品过程中产生的废水，其中主要成分为大豆乳清蛋白、低聚糖等。以前，大豆乳清水一直被当作废水排放。近年来，随着世界各国对大豆乳清研究的不断深入，开发利用大豆乳清水中的生理活性物质正逐渐成为研究热点。大豆乳清蛋白占大豆蛋白的6-7％，是非酸沉蛋白，其中的主要成分是分子量在8000-22000的胰蛋白酶抑制剂(SBTI)，过去SBTI被认为是大豆中的抗营养因子，可以抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶活性，降低蛋白质的消化和吸收利用，同时它还可作用于胰腺本身，造成机能亢进，胰腺分泌过多，还可造成胰腺肥大或增生。但是近年来国内外研究发现，低浓度的SBTI具有降低多种癌症发病率的作用，可应用为抗肿瘤药品的原料。由于SBTI的抗营养性，如何对大豆乳清蛋白进行处理，使其既保持抗癌活性，又提高大豆乳清蛋白的利用率，一直是人们关注的焦点。 

已有大量文献报道了乳清蛋白的回收方法。例如CN1537865公开的从大豆黄浆水提取乳清蛋白、核酸等成分；CN1954689和CN1364765公开的膜分离制备和提取大豆乳清蛋白的方法。但他们均未对SBTI的活性与抗肿瘤的关系进行研究，也没有探讨免疫功能与抗肿瘤功效的相关性。 

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤作用的大豆乳清蛋白的制备方法。 

本发明提供的一种具有抗肿瘤作用的大豆乳清蛋白的制备方法，包括如下步骤： 

（1）制备大豆乳清浓缩液：将生产大豆分离蛋白和豆制品的大豆乳清水用常规的絮凝离心法除杂，取上清调节pH到4.3-4.5；先用截留分子量为20000-25000Da的超滤膜超滤，取滤出液再用截留分子量6000-8000Da超滤膜超滤，得到分子量为6000-25000Da的大豆乳清蛋白浓缩液； 

（2）抗肿瘤大豆乳清蛋白的制备：将大豆乳清蛋白浓缩液放入微波炉中，以2450MHz微波加热到55-80℃取出，放入60-85℃的恒温水浴中保温5min-20min，然后在50℃以下真空 干燥，得到大豆乳清蛋白；该大豆乳清蛋白的胰蛋白酶抑制活性降低了40-60％。 

所述的步骤（2）中微波加热温度优选60-75℃；所述恒温水浴的温度优选65-80℃；所述的水浴保温时间优选10min-20min。 

将大豆乳清蛋白复溶，按照3-10g/Kg·d剂量喂食试验小鼠或大鼠，能够显著增强抗肿瘤效果，并提高体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能。作为优质蛋白补充剂，正常人体按照30-60g/d剂量摄入该大豆乳清蛋白，具有增强体质的作用。该大豆乳清蛋白可以作为一种抗肿瘤和增强机体免疫的药品和食品的原料。 

与现有技术相比，本发明的特点是，经两次超滤得到分子量为6000-25000的大豆乳清蛋白浓缩液，将大豆乳清蛋白浓缩液经微波加热到55-80℃后，再在60-85℃的水浴保温5min-20min，使乳清蛋白中SBTI适度变性，活性下降了40-60％，同时使具有增强免疫或抗肿瘤活性基团的外展更充分，得到的低变性大豆乳清蛋白，抗肿瘤功效可以提高50-80％。 

具体实施方式

实施例1 

将生产黄豆分离蛋白的乳清废水调pH至7.5，加入1mlo/LCaCl₂15ml/L，55℃低速搅拌20min，离心除杂后，调pH至4.3；先用截留分子量为20000-25000Da的超滤膜超滤，取滤出液用截留分子量6000-8000Da超滤膜超滤，得到乳清蛋白含量为30％、分子量为6000-25000Da的大豆乳清浓缩液。浓缩液经2450MHz微波加热到70℃取出，放入75℃的恒温水浴器中保温15min，45℃真空干燥得到低变性黄豆乳清蛋白，经BAPNA（Na-苯甲酰DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐）法检测，该低变性乳清蛋白中胰蛋白酶抑制活性降低了50％。