[发明专利]一种适用于双向电泳的蚜虫蛋白样品制备方法

权利要求书

1.一种适用于双向电泳的蚜虫蛋白样品制备方法，其特征在于包括下列步骤：

1)将蚜虫加入液氮一起研磨成粉末，将粉末放到微量离心管中，每10mg粉末加入1.5ml冷丙酮，混匀震荡后，离心收集沉淀；所述蚜虫与加入液氮的重量比为1：100；

2)将步骤1)的沉淀转移到研钵中室温干燥20min，干燥后的沉淀按4：1的重量比加入石英砂，然后按重量比1：100加入液氮再一次研磨；把粉末转移到新的离心管中，再加入等体积的饱和酚溶液和SDS缓冲液后离心；所述饱和酚为Tris饱和酚，其pH为7.9；所述SDS缓冲液配方为：30％蔗糖、2％SDS、pH8.0的0.1M Tris-HCl和5％β-巯基乙醇；

3)离心后溶液分层，上层的酚层溶液取出后放到新的离心管中，吸取的酚相加入5倍体积由甲醇溶解的0.1M乙酸铵溶液，把混合液放到-20℃冰箱中2-4小时，离心后收集沉淀；

4)将步骤3)的沉淀先用由甲醇溶解的0.1M乙酸铵溶液洗涤2次，然后用80％的冷丙酮洗涤2次，真空离心干燥1min，得到蚜虫的蛋白粗提物；

5)将蚜虫的蛋白粗提物与水化/裂解缓冲液混合，在30℃条件下水浴30min促进蛋白的溶解，然后在4℃条件下15000×g离心5min，收集上清液，即得到适用于双向电泳的蚜虫蛋白样品；所述蚜虫蛋白粗提物与水化/裂解缓冲液的质量体积比为200mg/100uL-400mg/100uL。

2.按权利要求1所述的适用于双向电泳的蚜虫蛋白样品制备方法，其特征在于所述水化/裂解缓冲液为含有5mol/L尿素、2mol/L硫脲、2％CHAPS、20mM DTT、5mM TCEP、0.002％溴酚蓝和2％IPG缓冲液的溶液。

3.按权利要求1所述的适用于双向电泳的蚜虫蛋白样品制备方法，其特征在于所述的蚜虫为麦长管蚜、大豆蚜、棉蚜和桃蚜。