[发明专利]重组灵芝免疫调节蛋白单甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯修饰物、制备方法和用途

权利要求书

1.重组灵芝免疫调节蛋白rLZ-8的单甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯修饰物，其特征在于单甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯单一修饰于重组灵芝免疫调节蛋白rLZ-8二聚体的N末端，修饰物分子中重组灵芝免疫调节蛋白rLZ-8二聚体分子和单甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯分子比为1∶1。

2.如权利要求1的修饰物，其特征在于其中的单甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯的结构式如图所示：

化学通式中n值的范围在10-451之间，分子量范围为500-20000Da。

3.重组灵芝免疫调节蛋白rLZ-8的单甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯修饰物的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：

A.在0.1M pH 5.0-pH 8.0磷酸盐缓冲液的反应体系中将rLZ-8二聚体与mPEG-SPA以摩尔比为1∶1-1∶6进行投料，置于西林瓶中，在锡纸包裹避光，室温下磁力搅拌反应1-2.5小时；

B.以SDS-PAGE电泳将反应后的产物进行鉴定，对胶体进行碘化钡染色，目的是观察mPEG-SPA组分；

C.将样品进行纯化回收，以Superdex^TM75 prep grade色谱手段对产物进行纯化，以含有0.15M NaCl的0.05M磷酸盐为流动相，pH值为7.0，流速1mL/min，等浓度洗脱，检测波长280nm、254nm、215nm，固定体积收集及峰收集相结合的方式收集样品；

D.将纯化回收的样品进行SDS-PAGE电泳进行分析，对胶体进行碘化钡染色，经过质谱检测分析，表明PEG只修饰在蛋白rLZ-8 N-末端，并未与其他的位点结合，因此进一步说明，通过本方法得到的rLZ-8的蛋白mPEG-SPA修饰产物，为单一的修饰产物，经纯化得到纯度达到98％的修饰产物。

4.重组灵芝免疫调节蛋白rLZ-8的单甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯修饰物在制备治疗化疗药所致白细胞减少症的药物中的应用。