[发明专利]肽、该肽的用途和生产方法以及固定有该肽的固相和其生产方法

说明书

本申请是原申请的申请日为2009年2月12日，申请号为200980105137.0，发明名称为《肽、该肽的用途和生产方法以及固定有该肽的固相和其生产方法》的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种新型肽、该肽的用途和生产方法，尤其涉及对亲水性的固相表现出特异性结合功能的肽、该肽的用途和生产方法。此外，本发明涉及能够用于使用固相化法检出或测定化合物的肽、和利用该肽检出或测定化合物的方法。此外，本发明涉及包含形成抗原结合部位的可变区的肽，涉及免疫球蛋白分子、以及包含可变区的单链抗体（scFv）、多价单链抗体（sc(Fv)_n）、恒定区融合型单链抗体（scFv-Fc）、Fab片段或F(ab’)₂片段以及固定有这些肽的固相和该固相的生产方法。

背景技术

抗体（免疫球蛋白）是与抗原特异性结合的蛋白质，是生物体内的体液免疫中的主角。图6的（a）为表示抗体（免疫球蛋白）基本结构的示意图。抗体分子61是2条分子量5万～7万的重链（H链）62和2条分子量2.3万的轻链（L链）63这4条链状多肽通过二硫键和非共价键结合而成的，整体呈Y字型。重链（H链）62由4或5个结构域构成，N末端侧配置有可变区（V_H）的结构域，朝向C末端侧配置有3～4个恒定区（C_H1、C_H2、C_H3、C_H4）的结构域。图6的（a）中，示出由4个结构域（V_H、C_H1、C_H2、C_H3）构成的重链62。轻链（L链）63由2个结构域构成，N末端侧配置有可变区（V_L）的结构域，C末端侧配置有恒定区（C_L）的结构域。

重链62和轻链63的可变区（V_H和V_L）被配置于N末端侧的2处，两者一体化，形成与抗原特异性结合的立体抗原结合部位。因此，抗体的特异性取决于重链和轻链的可变区（V_H和V_L）的氨基酸序列和组合，可变区（V_H和V_L）的氨基酸序列、组合根据所对应的抗原不同而不同。在各类型或亚型中，重链和轻链的恒定区（C_H1、C_H2、C_H3、C_H4和C_L）为几乎恒定的结构。

抗体分子61被蛋白酶中的木瓜蛋白酶在重链的C_H1和C_H2结构域之间的铰链部64处分解，如图6的（b）所示，被分解为2个Fab片段65和一个Fc片段66。通过另一种蛋白酶胃蛋白酶分解抗体分子61时，如图6的（c）所示，能获得的是2个Fab片段65在铰链部64通过二硫键连接而成的结构即F(ab’)₂片段67。Fab片段65、F(ab’)₂片段67具有由重链和轻链的可变区（V_H和V_L）形成的抗原结合部位，因此，具有针对抗原的特异性，能够用于抗原抗体反应。

进而，将重链的可变区（V_H）和轻链的可变区（V_L）通过连接肽69连接而成的结构即单链抗体（scFv）68，也能形成由重链和轻链的可变区（V_H和V_L）形成的立体抗原结合部位，因此，具有针对抗原的特异性，能够用于抗原抗体反应。图6的（d）是表示单链抗体（scFv）68的基本结构的示意图。图6的（d）中，重链的可变区（V_H）的C末端通过链状的连接肽69而连接到轻链的可变区（V_L）的N末端。

由于抗原抗体反应中抗原和抗体的特异性强，如果抗原结合部位发生变化则对应的抗原也会变化，因此需要对100万种以上的重链和轻链的可变区（V_H和V_L）的组合进行基础性实验以验证其显示何种抗原抗体反应。此外，利用抗原和抗体的特异性强这一点，可将抗原抗体反应用于各种用途和领域中。