[发明专利]一种用于核酸实时检测的探针及其应用

权利要求书

1.一种用于核酸实时检测的探针，其特征在于：探针是一条寡核苷酸，包括十个部分区域，3`端的第一区域（1）与5`端的第八区域（8）形成第一段双链，使得5`端连接的荧光基团或荧光供体（10）与3`端连接的淬灭基团或荧光受体（9）靠近，从而无荧光发出；第二区域（2）和第四区域（4）配对、第五区域（5）和第七区域（7）配对，构成另外2段双链；而第三区域（3）和第六区域（6）分别形成两个环形结构；并使探针的第三区（3）、第四区（4）、第五区（5）、第六区（6）的碱基与靶序列互补，形成靶序列结合区。

2.根据权利要求1所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于所述的位于3`端和5`端第一段双链结合区的长度为5-20bp。

3.根据权利要求1所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于所述的位于3`端与所述的靶序列结合区中一段序列互补双链结合区的长度为3-10bp。

4.根据权利要求1所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于所述的位于5`端与所述的靶序列结合区中一段序列互补双链结合区的长度为3-10bp。

5.根据权利要求1所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于靠近所述的靶序列结合区3`端的3`端环形结构的长度为3-15bp。

6.根据权利要求1所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于靠近所述的靶序列结合区5`端的5`端环形结构的长度为3-15bp。

7.根据权利要求1所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于所述的探针总长度为20-100bp，其中靶序列结合区10-50bp。

8.根据权利要求1所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于所述的探针为DNA或RNA。

9.根据权利要求1所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于所述的靶序列结合区中，可以引入至少一个或不引入非自然的核苷。

10.根据权利要求1~9任意一项权利要求所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于所述的第一段双链在中心线位置，而第二区域（2）和第四区域（4）配对双链和第五区域（5）和第七区域（7）配对双链接着分布在第一段双链的两侧，第三区域（3）的环形结构在第二区域（2）和第四区域（4）配对双链之间，第六区域（6）的环形结构在第五区域（5）和第七区域（7）配对双链之间。

11.根据权利要求1~9任意一项权利要求所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于所述的探针内部双链结合区域Tm值与扩增引物Tm值相当或高于退火温度2-12℃。

12.一种权利要求1~11任意一项权利要求所述的用于核酸实时检测的探针，其特征在于在靶序列实时PCR检测方法上应用。