[发明专利]一种基于脂质聚类分析的可可粉掺假检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于指纹图谱的可可粉掺假检测方法，特别是一种通过构建甘油酯指纹图谱以判定可可粉是否掺假的方法。

背景技术

天然可可脂(cocoa butter或cacao butter，CB)是可可豆经压榨法制得的具有特殊功能的油脂，盛产于热带(主要在非洲)，常温下为乳黄色固体，外观类似白蜡，具有芳香气味。可可粉具有浓烈芬芳的独特香味，含有丰富的多酚、蛋白质、碳水化合物、可可脂等多种营养元素和活性成分，是制造巧克力的重要原料，也用于生产当今世界三大嗜好性饮料之一。上个世纪90年代中期以来，随着可可制品应用范围的日趋扩大，对外贸易的拓展，我国可可加工行业发展迅猛，与此同时，国内市场上大量劣质或假冒可可粉充斥市场，不仅严重危害了食品安全，也影响了我国的国际贸易信誉和正规可可加工厂家的利益。金永生等对可可粉中掺入大豆粕、芝麻粕、花生壳和板栗壳等几种外源植物源性成分的PCR检测方法进行了探索研究，建立的方法准确性易受杂质影响，不能鉴别可可壳粉这种主要的内源性掺假物；另外，可能添加的外源植物源性成分种类繁多，难以预料，实际操作中不可能对所有可能添加的外源植物源性成分逐个进行PCR检测，因此该方法有很大局限性，难以推广。为此，本文尝试从脂质指纹分析角度建立可可粉掺假检测方法，即用索氏提取法提取11批不同来源的可可粉样品中的可可脂，通过反相高效液相色谱(HPLC)分离-蒸发光散射检测器(ELSD)检测得到可可粉的脂质色谱指纹图谱，根据其共有特征峰的相对峰面积，应用系统聚类分析(HCA)法,对模拟分别掺入板栗壳粉与桂圆壳粉且分别掺入代可可脂和棕榈油的可可粉掺假样品进行脂质指纹分析。

本发明可为我国可可粉的质量检测方法和质量标准的提升及完善提供科学依据与参考，从而促进我国可可粉产品的质量提高和稳定，更好地规范可可粉市场，维护消费者权益。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种准确可靠且较简便，可推广应用于可可粉的掺假检测方法。

本发明的技术方案为：

首先，构建可可粉甘油酯标准指纹图谱，包括可可粉脂质的提取、高效液相色谱的指纹分析及其标准指纹图谱的确定；

然后，根据可可粉甘油酯组成的测定方法，测定模拟掺假样品的脂质甘油酯组成；

最后，根据可可粉样品和模拟掺假样品脂质甘油酯组分的相对峰面积组成的矩阵，进行聚类分析。

本发明的具体步骤为：

1、可可粉脂质甘油酯指纹图谱的建立方法包括下列步骤：

（1）可可粉脂质的提取：称取2.50g左右可可粉，置于滤纸筒中，放入索氏抽提器的提取管中，并在提取瓶中加入2/3左右的石油醚，水浴47℃，6h。取出提取瓶，用旋转蒸发仪，浓缩至干。然后将提取瓶在105℃干燥2h，取出放置于干燥器内冷却，称重，重复此操作至恒重。准确称取一定量提取得到的脂质，溶解于三氯甲烷，使其浓度为5mg/mL左右。

（2）高效液相色谱分析：色谱柱：symmetry C18(250mm×4.6mm，5μm)。流动相：A为乙腈/氯仿（70：30），B为乙腈/氯仿（30：70）。二元梯度洗脱程序：0min，100%A；5min，70%A；25min，0%A；25.1~30min，100%A。柱温：40℃。流速：0.8mL/min。ELSD漂移管温度：85℃，N2流速：2.5L/min。在此条件下分别进样分析，得到可可粉甘油酯的色谱指纹图谱。以11号峰为参照，计算样品中各峰的相对保留时间。

（3）标准指纹图谱的建立：通过对11个不同产地的可可粉样品中甘油酯高效液相色谱图进行比较，确定共有特征峰，并将色谱数据导入指纹图谱专用软件得到由其共有特征峰构成的可可粉甘油酯的标准色谱指纹图谱。待测样品可与标准指纹图谱对比，区别其异同。

共有特征峰有14个，它们的相对保留时间RT(以11号峰POS为参照)的相对标准偏差RSD均小于1%；即：

1号峰平均RT为0.411，RSD为0.18%;

2号峰平均RT为0.465，RSD为0%;

3号峰平均RT为0.703，RSD为0.15%;

4号峰平均RT为0.743，RSD为0.22%;

5号峰平均RT为0.786，RSD为0.07%;

6号峰平均RT为0.848，RSD为0.12%;

7号峰平均RT为0.878，RSD为0.02%;

8号峰平均RT为0.899，RSD为0%;

9号峰平均RT为0.944，RSD为0.03%;