[发明专利]一种纯化醋酸特利加压素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种规模化纯化醋酸特利加压素的方法。

背景技术

醋酸特利加压素，英文名为Terlipressin,结构式为：

                                                

分子式为：C₅₂H₇₄N₁₆O₁₅S₂，分子量为1227.4。醋酸特利加压素临床用于治疗严重急性食管静脉曲张破裂出血，严重急性胃、十二指肠溃疡出血，急性糜烂性胃炎或出血性胃炎，胰、胆和肠屡的辅助治疗以及糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗。         目前，醋酸特利加压素为人工合成的三甘氨酸-赖氨酸-加压素，是合成的血管压素类似物，本身无活性，在体内经氨基肽酶作用，脱去N末端的3个甘氨酸残基后，缓慢地转化为有活性的赖氨酸加压素，用于治疗肝硬化门脉高压引起的急性食道静脉曲张出血，是一种安全有效的治疗急性静脉曲张出血的药物。

醋酸特利加压素明显优于血管加压素，在一项多中心临床研究中，醋酸特利加压素70%的患者出血终止，加压素为9%，输血需求量也低于加压素组。醋酸特利加压素也明显优于生长抑素和奥曲肽，在一项多中心临床研究中，从集中评价结果可知，与生长抑素和奥曲肽不同，醋酸特利加压能明显降低食管静脉曲张出血的死亡率。醋酸特利加压素联合硬化治疗优于单独硬化治疗，在一项596例肝硬化静脉曲张出血病人的多中心临床研究中，使用联合治疗97%的患者出血终止，明显优于单独硬化治疗，不仅能有效控制出血，而且可降低再出血的可能性。由于醋酸特利加压素的疗效优于血管加压素、奥曲肽、生长抑素，因而在第二届Baveno国际统一会议将其作为治疗急性静脉曲张出血的首选药物。

国内外关于醋酸特利加压素的制备文献报道很少，而具体的纯化方法还没有文献报道，特别是规模化纯化醋酸特利加压素的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一条适于规模化生产醋酸特利加压素的纯化工艺方法，使用反相高效液相色谱法纯化醋酸特利加压素，并用HPLC转盐法交换转盐，效率高，成本低且收率好，达到产业化的要求，解决现有技术分离得到醋酸特利加压素的空白。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

   一种纯化醋酸特利加压素的方法，包括如下步骤：

   1）将特利加压素氧化液以孔径0.45μm滤膜过滤后待用，以固定相聚苯乙烯-聚乙烯苯为基质的聚合物树脂填料的聚合物色谱柱，流动相为两相，其中磷酸三乙胺缓冲液为A相，色谱乙腈为B相，梯度洗脱进行一次纯化，收集目的峰值含量大于90%的肽溶液；

 2）以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱进行二次纯化同时转盐，流动相为两相，其中醋酸水溶液为A相，色谱乙腈为B相，收集目的峰值含量大于99%的肽溶液；

3）将最终的高纯度肽溶液减压旋蒸浓缩冷冻干燥，得粉末状成品肽。

优选的方案是：所述磷酸三乙胺缓冲液pH为3.0-4.0；

优选的方案是：所述一次纯化中梯度洗脱的B相质量百分浓度为10%～50%，检测波长为220nm；

优选的方案是：所述二次纯化及转盐中醋酸水溶液质量百分浓度为0.5%，梯度洗脱为三段式，依次为B相的质量百分浓度：5-5%，0-60min；B相的质量百分浓度：15-30%，60-90min; B相的质量百分浓度：30-80%，90-120min，检测波长为220nm。

本发明的有益效果是：本发明提出的一条适于规模化生产醋酸特利加压素的纯化工艺方法，先以聚合物制备柱进行一次纯化得到90%以上的产品，再以C18填料的制备柱进行二次纯化同时转盐，不仅能得到HPLC纯度大于99.0%的精肽，还有效地提高了产品的收率，降低了成本，同时生产方法简单，易于操作，从而达到大规模工业化生产的目的。

具体实施方式

实施例1

1．样品处理：在特利加压素氧化液中加入少许乙腈超声至液体澄清，用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液备用。

2．一次纯化