[发明专利]培育蛹虫草抗退化菌种的方法

说明书

技术领域

本发明属于真菌的制种领域，具体涉及一种蛹虫草菌种培育的新技术。通过这种方法，能得到抗退化的优质菌种。

背景技术

蛹虫草子实体[Cordyceps militaris]又称北冬虫夏草子实体或子座，简称北虫草，子囊菌亚门，麦角菌科，虫草属。近年来人工培养子实体遍及城乡，已成为我国的一个新兴产业。但无论是专业人员还是专业公司，在栽培实践中往往出现只长菌丝不长草（子实体）、不转色，或草的产量低、质量差等问题。有效成份含量极少且不稳定，不但难以实现标准化生产，甚至使众多生产者绝收破产。究其原因，主要是菌种退化，菌种不能继代使用。菌种往往只能使用一次，勉强继代使用也不超过两代。众多技术人员为防止菌种退化，用尽了各种传统的制种办法，如组织分离优选部位、孢子分离选优、提纯复壮、引进优种、杂交选优等，但始终阻止不了菌种的快速退化。尽管诸多专家学者发表了不少论文意见，但理论要变成实践意义上的生产力尚需要漫长的时间。蛹虫草菌种的快速退化，已成为该产业发展的瓶颈。对广大生产者来说，菌种快速退化问题亟待解决。本发明就是在多年的生产实践中总结出来的简便易行的有效方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种培育蛹虫草抗退化菌种的方法，所得到的蛹虫草抗退化菌种，可连续十次继代使用。

本发明的技术方案为：一种培育蛹虫草抗退化菌种的方法，包括下列步骤：

（1）培养优胜种：制备有伴生菌生长的蛹虫草母种管，PDA培养基+氯霉素，先斜面接种伴生菌拟青霉或被毛孢菌种，进行培养，再接入蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种（Cordyceps militaris）保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2011年12月12日，保藏号：CGMCC No.5577，继续进行培养，使蛹虫草生长旺盛并全部吞没伴生菌，得到蛹虫草种优胜种；

（2）将优胜种管置于0～-20℃的环境中培养不少于30天，然后将其置于18～25℃条件下恢复生长3～5天；

（3）将恢复后的优胜种管去掉管塞，置于15～25℃的杂菌环境中培养5～7天；然后再盖上管塞将其置于28～36℃的杂菌环境中培养5～7天；或

先将恢复后的优胜种管置于28～36℃的杂菌环境中培养5～7天；然后再去掉管塞置于15～25℃的杂菌环境中培养5～7天；

（4）经上述（1）～（3）步骤培养后，试管菌种变色，杂菌生长，其中有少量具有生命活力的蛹虫草菌丝，将其分离于PDA培养基上，置于18～25℃条件下培养6～8天后，按制种常规提纯复壮，得到蛹虫草抗退化菌种。

优选的是，上述培养优胜种的具体步骤为：制备伴生菌管多只，PDA培养基+氯霉素，45ug/1000ml，管斜面中间接0.8～2mm拟青霉或被毛孢种一块为伴生菌，置于10～18℃条件下培养7～10天，待菌种定植并长开时，在斜面两端距伴生菌1cm之外，分别接入蛹虫草菌种2～5mm各一块，将菌管置于18～20℃条件下培养3～5天后，待蛹虫草菌种定植并散开生长之时，将培养温度提高到24～26℃，3～5天后蛹虫草生长旺盛，并全部吞没了伴生菌，得到蛹虫草种优胜种。

适应性培养是本技术的主要特征，即制备有低温伴生菌生长的蛹虫草母种管，置于低温、高温、缺氧及杂菌生长的环境中培养菌种，经培养后的母种再提纯复壮，得到蛹虫草抗退化菌种，然后再进入原种和栽培种的应用阶段。

实践证实，抗退化菌种用于栽培中，连续十次继代使用不会退化，生物转化率在70％左右，得到的蛹虫草子实体，表现为色泽深金黄，保持原始特性，正常培养工艺范围内各项指标稳定，经检测其有效成份，虫草素含量不少于0.1％，腺苷含量不少于0.055％，多糖含量不少于2.5％，符合《中华人民共和国卫生部公告2009年第3号》关于批准蛹虫草为新资源食品的公告规定的指标。

具体实施方式

本发明需要蛹虫草优质首代转管母种，该母种经组织分离、孢子分离得到或引进的均可。该菌种也可在中国普通微生物菌种保藏管理中心获取，保藏号为CGMCC No.5577。伴生菌为拟青霉或被毛孢中的一种。拟青霉（Paecilomyces hepiali）和被毛孢（Hirsutella sinensis）可通过商业渠道获得，如河南省泌阳县真菌研究所、山东省济宁市光大食用菌研究所等均有销售。

本发明蛹虫草抗退化菌种的培育方法，具体步骤如下：