[发明专利]一种从发酵菌体中提取核糖核酸的方法

权利要求书

1.一种从发酵菌体中提取核糖核酸的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）将发酵菌体制备成悬浊液；

（2）将步骤（1）所得悬浊液与中性盐溶液接触，以对菌体中的核糖核酸进行浸提，所述浸提的方法包括：在pH值为6.5-8.5，温度为70-110℃的条件下，将接触后的混合物静置；

（3）将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离，并将得到的上清液进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（1）中，以所述悬浊液中的菌体计，将所述发酵菌体配制成5-15g/100mL的悬浊液。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤（1）中，以所述悬浊液中的菌体计，将所述发酵菌体配制成6-12g/100mL的悬浊液。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述发酵菌体选自谷氨酸发酵菌体残渣、赖氨酸发酵菌体残渣和酒精发酵菌体残渣中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（2）中，相对于悬浊液中的1g菌体，所述中性盐的用量为0.72-1.2g；所述中性盐溶液的浓度为5-12重量%；所述中性盐选自NaCl、KCl、CaCl₂和MgCl₂中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（2）中，浸提的条件包括：pH值为7-8，温度为80-100℃，静置时间为1-4h。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（3）中等电点沉淀的条件包括：pH值为2.0-2.5，温度为0-10℃，时间为0.25-1.0h。

8.根据权利要求1-7中任意一项所述的方法，其中，所述方法还包括在将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离之前，将所述浸提产物进行酶水解，以除去浸提产物中的蛋白质。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述酶水解的方法包括在酶水解条件下将浸提产物与蛋白酶接触，所述酶水解条件包括pH值为6.5-8.5，温度为30-50℃，时间为1-4h。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述酶水解条件包括pH值为7.0-8.0，温度为35-45℃，时间为2-3h。

11.根据权利要求9所述的方法，其中，相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的用量为30-60U。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的用量为45-55U。

13.根据权利要求9-12中任意一项所述的方法，其中，所述蛋白酶为碱性蛋白酶和/或中性蛋白酶；所述碱性蛋白酶为枯草杆菌碱性蛋白酶，所述中性蛋白酶为枯草杆菌中性蛋白酶。

14.根据权利要求1-13中任意一项所述的方法，其中，所述方法还包括对步骤（3）得到的沉淀核糖核酸进行醇洗。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，采用无水乙醇对沉淀核糖核酸进行醇洗，所述无水乙醇的用量为沉淀核糖核酸体积的2-4倍。