[发明专利]一种机用需氧型细菌培养液

说明书

技术领域

本发明属于血液检测技术领域，尤其涉及到一种机用需氧型细菌培养液。

背景技术

全自动需氧血培养瓶是一种应用于医学临床检验领域的新型微生物培养系统，是与全自动血培养仪配套使用的新一代微生物检测试剂。它由瓶体、固体传感器和培养液等三部分组成，与全自动血培养仪器结合使用即可快速检测血液或其他标本中是否感染细菌、真菌及分枝杆菌，从而为临床迅速有效地进行抗感染治疗提供诊断依据。全自动血培养系统最早在上个世纪九十年代由美国BD公司，法国梅里埃公司等开始研发，目前已经批量生产和销售，对中国处于技术保密状态，国外进口产品价格昂贵，给我国的医疗机构及患者带来沉重的经济负担。目前我国国内只有上海奥普生物技术公司等少数生物企业从事此项研究，尚未形成产业化。研制质量优良，价格便宜的自动培养瓶，打破国际垄断，不仅具有良好的经济效益，并且能够降低患者负担，减少医疗费用，具有广泛的社会效益。

现在培养瓶中最重要的部分之一的培养液多数是增菌肉汤，它的检测原理是提供细菌生长的必要营养物质，使致病的细菌快速生长，从而代谢的产物通过和化学试剂反应释放出能够被仪器识别的物理和化学信号，来检测出血液致病的病原体，随着检测仪器的迅速发展，其精度及灵敏度也显著的提高，而且抗生素类的药物的发展及普遍使用，从而使培养液也必须发生相适应的变化，现在培养液的要求是使细菌繁殖的更快，还要拮抗中和血液内抗生素，从而确保检测高效、省时、准确度高。

发明内容

本发明公开的一种机用需氧型细菌培养液，显著提高细菌繁殖的速度，且能够拮抗中和血液中的抗生素，从而使细菌生长的速度快，缩短血液的检测时间；另外，细菌代谢产物可以通过和培养液中碳酸氢盐反应转变成能被仪器识别的化学讯号，使血液检测准确度高，因此在血液临床检验领域拥有广泛的应用前景。

该培养液包括细菌生长所需的营养物质、抗凝血剂与拮抗抗生素试剂，三种成份的浓度比是52:3:10。细菌生长所需的营养物质可以由蛋白胨、胰胨、牛肉膏粉、心脑浸粉、葡萄糖中的一种或多种混合物与维生素和碳酸氢盐组成，其浓度比为26:0.03:0.68；维生素可以由维生素A、维生素D、维生素E、B族维生素、维生素C中的一种或多种混合维生素组成；碳酸氢盐由碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢铵中的一种或多种组成；抗凝血剂可以为肝素、乙二胺四乙酸盐、枸椽酸钠其中的任意的一种；能够与血液中抗生素发生拮抗中和作用的试剂可以是聚茴香脑磺酸、对氨基苯甲酸、硫酸镁、吸附抗生素复合树脂中的一种或多种混合试剂；除此之外，在制备培养液时还需加入盐或酸液、碱液之类用以提供适合细菌生长的PH环境。

如上述配方选择带有葡萄糖作为细菌生长的营养物质，则在制备培养液中应注意，除成份中的葡萄糖、吸附抗生素复合树脂和碳酸氢盐外，全部称量混合，加热溶解，溶解后需将溶液进行常温冷却，待稍冷却时加入葡萄糖和无菌蒸馏水；再将培养液高压蒸气灭菌，同时冷却至室温；将碳酸氢盐称量溶于无菌蒸馏水中，单独盛于不能漏气且可以高压灭菌的溶器内，高压蒸气灭菌，冷却至室温；在无菌操作台中将两者混合，用盐、酸液或碱液调节PH值至7.2-7.3后，将培养液分装于血培养瓶内用灭菌锅进行灭菌，冷却至室温，调节瓶内气压至规定范围，封口，批检、质控后培养液即可使用。

具体实施方式

准备两个灭过菌的带密封盖的1500ml玻璃容器、一个200ml的烧杯，准确称量蛋白胨15.00g、胰胨3.00g、牛肉膏粉3.00g、心脑浸粉2.00g、葡萄糖粉3.00g、维生素B6粉末0.03g、碳酸氢钠粉末0.68g、枸椽酸钠1.50g、对氨基苯甲酸0.03g、聚茴香脑磺酸0.15g、硫酸镁0.20g、氯化钠5.00g、吸附抗生素的混合树脂5g，除成份中葡萄糖、混合树脂和碳酸氢钠，其余所有成份装入玻璃容器中，用无菌蒸馏水50ml加热溶解，完全溶解后，需将溶液进行常温冷却，稍冷却后加入葡萄糖和无菌蒸馏水，加入的无菌蒸馏水至900毫升；再将培养液高压蒸气灭菌15min后，冷却至室温；将称量好的碳酸氢盐溶于装在烧杯中的无菌蒸馏水，单独盛于密闭且可以高压灭菌的容器内，高压蒸气灭菌15min，冷却至室温；在无菌操作台将两者混合于玻璃容器中，用盐酸或氢氧化钠调节PH值至7.2-7.3后，另加入吸附抗生素的混合树脂5g，将培养液定容至1000ml，将培养液分装于血培养瓶内用灭菌锅进行灭菌，冷却至室温，调节瓶内气压至规定范围，封口，批检、质控后培养液即可使用。