[发明专利]一种基于双酶偶联高通量检测微生物生产二元酸的新方法

权利要求书

1.一种利用二元酸氧化酶和过氧化物酶偶联反应的检测微生物生产二元酸的高通量检测新方法，步骤如下：

(1)将培养基活化菌群经稀释后涂布到固体培养基中，待单菌落长出后接种到96深孔培养板中培养；

(2)将96深孔培养板利用冷冻离心机在合适的条件下离心，取其上清液进行测定；

(3)利用双酶偶联的方法，在96孔黑色微孔板中结合试剂A测定上述上清液中二元酸含量；

2.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的96深孔培养板是体积为3mL，但是每孔中加入0.5-2mL的培养基；

3.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的冷冻离心机能够直接离心96深孔培养板；

4.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的离心条件为4℃，4000rpm离心10-60min；

5.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的上清液中不能含有菌体；

6.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的双酶是二元酸氧化酶和过氧化物酶；

7.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的试剂A中各物质含量为：AmplexUltraRed：0.05-1.0mM，过氧化物酶：0.1-10U/mL，PBS：pH 7.4。

8.按权利要求1中所述的方法，其特征是：待试剂A、二元酸氧化酶及样品加入到其中后在37℃下反应5-60min；

9.按权利要求1中所述的方法，其特征是：所述的测定条件为：Ex/Em 490/585(nm)。