[发明专利]抑制细胞周期进程的化合物在制备抑制或去除肿瘤细胞中双微体药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一类抑制细胞周期进程的化合物在制备抑制或去除肿瘤细胞中双微体药物中的应用。通过去除肿瘤细胞中双微体数目、减少双微体携带癌基因扩增而有效降低含有双微体的恶性肿瘤细胞的恶性程度。本发明属于肿瘤生物治疗技术领域。 

背景技术

双微体（double minutes或double minute chromosomes，DMs）是只存在于肿瘤细胞和耐药细胞中的基因扩增的主要细胞遗传学标志，为细胞中位于染色体外、小的、成对存在的无中心粒的染色质小体，是染色体外遗传单位的一种主要存在形式。 

1962年首次在一些恶性肿瘤细胞和渗出液及肺癌胸水的转移细胞中发现这种染色体外的微体。目前已在白血病、恶性淋巴瘤等多种血液系统肿瘤，和肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌及儿童神经母细胞瘤等实体性肿瘤中都可检测到双微体，双微体是恶性肿瘤基因扩增的主要的细胞遗传学标记。不同类型的肿瘤细胞中双微体具有较高的异质性，携带癌基因和多药耐药性基因扩增使细胞具有选择优势，这些基因的扩增是导致癌症发生，发展，及癌细胞产生耐药的重要元素。减少或去除细胞内的双微体，从而减少癌基因和耐药基因的扩增及其蛋白的功能，是一种有效的减少癌细胞恶性的方法。 

从肿瘤细胞中消除双微体上扩增的癌基因和耐药基因，能够降低其致癌性或恢复细胞对药物的敏感性，因此，去除双微体是治疗以基因扩增为标志的疾病的可行途径。目前羟基脲应用于肿瘤治疗，但对肿瘤并没有较强的特异性，羟基脲半衰期短，高剂量，易产生快速耐受性。 

针对肿瘤的特点进行特异性治疗可以提高肿瘤治疗的敏感性和特异性，有的放矢，我们针对肿瘤细胞最基本特征，即增殖能力强这一特点对肿瘤细胞的细胞周期进行干预，预通过减少肿瘤细胞中双微体数目和携带癌基因和耐药基因扩增，从而 控制肿瘤细胞的恶性程度，针对肿瘤细胞中双微体的靶向性治疗将会成为一种新的肿瘤治疗策略。 

发明内容

本发明的目的在于，针对目前肿瘤治疗的效果欠佳，从而提供一种针对含有双微体的肿瘤的靶向生物治疗策略，通过选择抑制细胞周期进程的化合物去除细胞中双微体数目和携带基因扩增而降低含有双微体的肿瘤细胞的恶性程度。 

本发明针对含有双微体的肿瘤细胞，选择抑制细胞周期进程的化合物吉西他滨、喜树碱、苦参碱和紫杉醇低浓度作用，其剂量低于对照组羟基脲上千倍，发现吉西他滨、喜树碱、苦参碱和紫杉醇可通过去除细胞中的双微体数目和减少携带癌基因扩增，而有效降低含有双微体的肿瘤细胞的恶性程度。 

因此，本发明提出了抑制细胞周期进程的化合物在制备抑制或去除肿瘤细胞中双微体药物中的应用，其特征在于所述的化合物为吉西他滨、喜树碱、苦参碱或紫杉醇其中至少一种或其组合。 

在本发明的一个具体实施例中，所述的肿瘤细胞为卵巢癌细胞。 

为了达到以上目的，本发明采用的技术方案为： 

1、检测肿瘤细胞的细胞遗传学特征 

选择含有双微体的人卵巢癌细胞系UACC-1598为研究对象。 

（1）常规细胞培养； 

（2）细胞中期核型标本制备以及检测细胞株含有双微体的信息。 

2、细胞周期进程抑制剂对细胞中双微体的影响 

选用低浓度各种细胞周期进程抑制剂持续作用此种细胞，优化条件，检测细胞中双微体的变化。 

选用4种与细胞周期进程相关的抑制剂：①吉西他滨，核糖核苷酸还原酶抑制剂，作用于细胞周期DNA合成期（购自法国礼来公司）；②10-羟基喜树碱，选择性抑制DNA拓扑异构酶I(TopoI)（购自上海龙翔生物医药开发有限公司）；③苦参碱，阻滞细胞在G0/G1期，抑制DNA拓扑异构酶II（TOPO II)（购自中国芜湖甙尔塔医药科技有限公司）；④紫杉醇，微管稳定剂，抑制细胞有丝分裂，停止在细胞周期G2期和M期（购自上海龙翔生物医药开发有限公司）。以已知有作用的羟基脲（购自上海龙翔生物医药开发有限公司）作为阳性对照。 

（1）双微体数目检测 

抑制剂作用后，按照常规方法进行中期核型制备，计数50-100个核型中的双微体数目。 

（2）双微体携带基因扩增水平检测 

已知人卵巢癌细胞UACC-1598细胞中双微体上携带EIF5A2和MYCN基因扩增，通过实时定量PCR（qPCR）方法检测抑制剂作用下EIF5A2和MYCN基因的扩增水平。 

3、细胞周期进程抑制剂对细胞生物学行为的影响 

（1）绘制细胞生长曲线检测加入抑制剂作用后的细胞增殖能力变化；