[发明专利]丙戊酸免疫原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物制剂，具体涉及的是丙戊酸免疫原及其制备方法和应用。

背景技术

丙戊酸，其结构式如下：

丙戊酸是一种广谱性抗癫痫药物，由于其疗效显著、安全性好等优点，临床主要用于治疗全身性或部分性类型的癫痫发作，包括各种癫痫、躁郁症和少见的重性抑郁障碍。在丙戊酸的临床给药治疗过程中，由于患者个体药物代谢动力学差异，造成丙戊酸的给药量与血药浓度之间的相关性较差，同时由于丙戊酸的有效治疗窗窄，临床血药浓度的参考范围为50-100 μg/ml，而在高于参考范围的血药浓度时会出现中枢神经系统抑制、呼吸不足、心动过速、低血压和肝毒性等毒副作用，严重时会导致昏迷，而低于有效的浓度时又达不到相关疗效。因此在治疗期间对病人的血液药物水平进行监测非常重要。

    现有的丙戊酸药物浓度监测的方法主要有荧光偏振法、微粒子化学发光法和比浊法。高度自动化的荧光偏振法和微粒子化学发光法因其简便快速的优点成为临床丙戊酸血药浓度监测最常用的方法，但其试剂盒全部依赖进口，价格昂贵和有效期较短是其不可回避的缺点，造成临床使用难以普及。

发明内容

为解决上述问题，本发明提出了一种新型的丙戊酸免疫原及其制备方法和应用，研制出一种含有丙戊酸特异性抗体和酶标偶联物的免疫检验试剂。

为达到上述技术目的，实现上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

丙戊酸免疫原，有式（Ⅰ）的结构式：

式（Ⅰ）

其中：

    R为连接基团，是-(CH₂)_n-COO^- 、O-(CH₂)_n-COO^-、-S-(CH₂)_n-COO^-、-NH-(CH2)_n-COO^-中的一种，所述n为1至20之间的整数；优选地，R为-(CH₂)_n-COO^- , n为1至20之间的整数；更为优选地，所述R为-(CH₂)₄-COO^- ；

    载体为具有免疫原性的蛋白质，最常用的免疫原性载体包括牛血清白蛋白，血蓝蛋白（KLH）和甲状腺球蛋白等。

进一步的，丙戊酸免疫原的制备方法，包括以下步骤：

步骤1）制备具有式（Ⅱ）中结构的丙戊酸衍生物；

式（Ⅱ）

步骤2）将具有免疫原性的载体溶解成具有免疫原性的载体溶液；

 步骤3）将具有式（Ⅱ）中结构的丙戊酸衍生物加入到所述具有免疫原性的载体溶液中，使具有式（Ⅱ）中结构的丙戊酸衍生物中连接基团所在部分和具有免疫原性的载体发生缩聚反应，形成丙戊酸免疫原。

进一步的，当所述R为-(CH₂)₄-COO^-时，丙戊酸免疫原的制备方法，包括以下步骤：

（1）、合成具有式（Ⅱ）结构的丙戊酸衍生物

1、制备化合物2：

用有机溶剂A溶解1-10 g经正己烷洗涤的NaH，形成溶液1；用有机溶剂A溶解5-30 g的丙戊酸，形成溶液2，将溶液2全部逐滴加入溶液1中进行混合。其中有机溶剂A的使用量根据需要在100-300 mL左右。经通入惰性气体反应后，加入1-10 g的二异丙胺、0.1-1.0g的丁基锂和5-20 g的6-溴-1-己烯，待反应完成后经减压浓缩、萃取、过滤、干燥和抽真空浓缩得到化合物2，即如下结构式（Ⅳ）中的化合物。                      

                         式（Ⅳ）

利用丙戊酸制备化合物2的化学反应式如下：

  

2、制备丙戊酸衍生物粗提物

用有机溶剂B溶解5-20 g的化合物2，1-10 g NaHCO₃，经冰浴至0℃反应一定时间后得到溶液3，有机溶剂B的使用量根据需要在50-100 mL左右。先后分别向反应溶液中加入20-40 g高锰酸钾和20-40 g亚硫酸氢钠，冰浴至0℃反应一段时间后，经过滤、减压浓缩、萃取、洗涤、干燥等步骤得到具有式（Ⅱ）中结构的丙戊酸衍生物粗提物。