[发明专利]一种短肽及其制备方法和在诊断或治疗与apoA-I相关疾病中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及具有药理作用的多肽，具体涉及一种多肽及其制备方法及其在诊断或治疗与apoA-I相关疾病中的应用。

背景技术

apoA-I是HDL的一种主要载脂蛋白成分，能驱动胆固醇的逆转运，可接受外周细胞过剩胆固醇并将其转运回肝脏HDL颗粒，同时也具有抗炎、抗氧化及抗冠状动脉粥样硬化作用。目前，根据apoA-I的生物结构和特性而设计合成的apoA-I模拟肽有18A小肽(如Ac-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH2)，其均不存在apoA-I的同源性序列，但能形成类似apoA-I的A级双亲螺旋结构，从而具有连接脂质的生物特性。通过调整18个氨基酸中苯丙氨酸残基(F)数量及其位置，可设计合成多个不同的apoA-I模拟肽。根据这些苯丙氨酸的数量，这些小肽分别被命名为2F、3F、4F等。相关的物理生物特性研究显示，18A小肽的疏水能力随苯丙氨酸残基数量的增加而上升，这也从理论方面反映了小肽的脂亲和能力。迄今为止，大部分apoA-I模拟肽均具有良好的脂连接能力，但生物特性却不相同。根据apoA-I的生物特性，具有双亲性的apoA-I模拟肽已经被设计并开展相关的实验研究项目。D-4F是一种apoA-I模拟肽，由18个D-氨基酸组成，具有通过哺乳动物胃肠道抑制酶降解的优点。在ApoE基因缺陷小鼠的饮用水中加入D-4F能够显著抑制动脉粥样硬化的发展。给这些小鼠口服D-4F能通过提高apoA-I和对氧磷酶(PON)活性，从而增加抗炎性HDL的颗粒组分，最终达到改善HDL介导胆固醇胆固醇流出并促进巨噬细胞胆固醇逆向转运。这些实验研究结果提示，apoA-I模拟肽具有潜在治疗红斑狼疮、及其伴有的CHD病变的临床价值和意义。

系统性红斑狼疮(SLE)并发动脉粥样硬化(AS)是SLE主要致死原因之一。早在1976年，人们已经注意到了SLE死亡率曲线呈″双峰″模式，一个是在活动性狼疮早期阶段败血症的高发生率，另一个是非活动性狼疮晚期阶段心肌梗死的高发生率。尽管各种疾病控制措施大大提高了系统性红斑狼疮患者的生存率，然而AS仍然是导致SLE患者死亡的主要原因。红斑狼疮的病例对照(年龄，种族，和性别相匹配)研究表明：在年龄小于50岁的红斑狼疮的患者中，31-37％患者表现出AS病变的代表性标志物，而对照组中仅有9-15％的人群表现出这种代表标志物；在年龄大于或等于50岁的患者中，70-80％的狼疮患者表现出动脉粥样硬化病变的代表性标志物，而对照人群中只有21-45％的人具有这种代表性标志物。Framingham研究结果显示：包括高血压、肥胖、糖尿病、吸烟、高胆固醇血症、绝经后状态等在内传统危险因素均不能完全解释红斑狼疮患者中冠心病加重的原因，而系统性红斑狼疮本身(非长期使用糖皮质激素的情况下)依然是一个独立危险因素。尽管疾病病程与系统性红斑狼疮损伤指数都是促进动脉粥样硬化(颈动脉斑块)的独立预测因素，但狼疮如何增加动脉粥样硬化的发生风险尚未完全明了。

发明内容

本发明的目的在于提供一种类似apoA-I，具有脂类连接能力，能有效地通过减缓动脉硬化、肾小球肾炎、蛋白尿、自身免疫性抗体异常以及严重的炎症反应过程从而阻止加速性动脉粥样硬化的鼠类狼疮模型狼疮样病变的多肽。

本发明的另一个目的是提供一种上述多肽的制备方法。

本发明进一步目的在于提供上述多肽在诊断与治疗与apoA-I相关疾病中的应用。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

本发明经过大量的研究发现，18氨基酸组成的apoA-I模拟小肽具有良好的生理效果，同时，在该类模拟肽中，苯丙氨酸的含量对其效果的发挥具有重要的作用。我们前期研究表明，D-4F具有治疗红斑狼疮、及其伴有的CHD病变的临床价值和意义。然而，模拟肽中的D型氨基酸是否是必须的仍是未知。因此，我们采用同种类L型氨基酸来替代D-4F中的氨基酸，以期证明L氨基酸的非必要性，同时又能够具有相类似甚至更好的生理疗效。

在多肽合成中，每生成一个肽键，都需要经过官能团保护、缩合、去保护等操作步骤，加上每一步产物的分离纯化，操作相当复杂而且费时，因此现在多采用固相合成法进行多肽的合成。固相合成法有两种，即Fmoc法和tBoc法，由于Fmoc法币tBoc法存在更多优势，所以本发明采用Fmoc法固相合成法L-4F。合成中采用的缩合剂为HBTU；HBTU：苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐，其配方以及用量均为本领域人员共知的，此处的Fmoc法是本领域的通用方法，其操作方法可参考相关教科书。