[发明专利]产辅酶Q10新菌株彭氏变形杆菌CA8及其应用有效
申请号: | 201210260349.X | 申请日: | 2012-07-20 |
公开(公告)号: | CN102994409A | 公开(公告)日: | 2013-03-27 |
发明(设计)人: | 钟卫鸿;孔卓怡;柳华贵;钟莉;邱乐泉;吴石金 | 申请(专利权)人: | 浙江工业大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12P7/66;C12R1/01 |
代理公司: | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人: | 黄美娟;冷红梅 |
地址: | 310014 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 辅酶 sub 10 菌株 变形 杆菌 ca8 及其 应用 | ||
(一)技术领域
本发明涉及一株产辅酶Q10新菌株——彭氏变形杆菌CA8及其在微生物发酵制备辅酶Q10中的应用,属于微生物制药领域。
(二)背景技术
辅酶Q10(CoenzymeQ10,CoQ10)广泛存在于动物、植物及微生物体内,是生物细胞呼吸链中重要的递氢体,也是一种良好的生化药物。它具有抗氧化性、消除自由基、提高机体免疫力等功能,已广泛应用于各类心脏病、糖尿病、癌症、急慢性肝炎、帕金森症等疾病的治疗。制备辅酶Q10的方法主要有动物细胞提取法、烟叶茄尼醇半合成法、完全合成法、微生物发酵法或植物细胞培养法。与其他方法相比,微生物发酵法具有产物活性高、原料成本低、易控制及可实现大规模生产等特点。获得优良的发酵菌株是微生物发酵法生产辅酶Q10的关键之一。目前已报道的辅酶Q10发酵菌株主要属于假单孢菌属、酵母菌属、光合细菌属以及副球菌属等。发酵菌体提取辅酶Q10方法多为醇碱皂化后提取方法,步骤烦琐,费时费力,且提取溶剂损耗较大。
(三)发明内容
本发明的目的是为了提供一株产辅酶Q10产量较佳的新菌株,以及利用该菌种发酵液制备辅酶Q10的方法。
本发明采用的技术方案是:
一株辅酶Q10产生菌——彭氏变形杆菌(Proteus penneri)CA8,保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国,武汉,武汉大学,430072, 保藏编号:CCTCC No:M2012208,保藏日期:2012年6月10日。
所述彭氏变形杆菌CA8特征如下:菌株在LB琼脂平板上培养1天后呈半透明润泽,较小,圆形,表面光滑,易挑起;菌体呈杆状,大小为(0.4~1.0)μm×(0.8~1.8)μm,具周身鞭毛,能运动,革兰氏染色阴性,无芽孢;兼性厌氧,苯丙氨酸试验呈阳性,氧化酶反应、明胶水解试验、吲哚试验、柠檬酸试验、V-P反应呈阴性,利用葡萄糖、乳糖等产酸,不利用水杨苷,最适宜生长温度为37℃。
本发明的CA8菌株,分离自喀麦隆Ebolowa土壤,经形态学、生理生化、Biolog GENШ鉴定和16S rRNA序列的系统发育分析,发现该菌株属于彭氏变形杆菌,命名为Proteus penneri CA8。目前国内外尚未见到有关变形杆菌应用于在辅酶Q10生产的研究报道。
本发明发酵菌体的超声破碎和提取辅酶Q10的工艺同样未见报道。
本发明还涉及所述的彭氏变形杆菌CA8在微生物发酵制备辅酶Q10中的应用。
所述应用为:以彭氏变形杆菌CA8接种于适用于彭氏变形杆菌的液体培养基,于30~37℃下培养48~60h,所得发酵液离心收集湿菌体,湿菌体经破碎提取得到所述的辅酶Q10。
所述适用于彭氏变形杆菌的液体培养基为常规适用于彭氏变形杆菌的液体培养基,本发明中可按如下组成配制:碳源10~20g、氮源5~15g、KH2PO4 0.5g、Na2HPO4 1.5g、MgSO4 0.5g,水1000ml,pH6.0~8.0。
所述碳源为常规用于培养基配制的碳源,如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖等,优选为乳糖。
所述氮源为常规用于培养基配制的碳源,如酵母膏、硫酸铵等,优选 为酵母膏。
更为优选的,所述适用于彭氏变形杆菌的液体培养基按如下组成配制:加入乳糖40g、酵母膏40g、KH2PO4 0.5g、Na2HPO4 1.5g、MgSO40.5g,水1000ml,pH8.0。
优选的,所述破碎提取为超声破碎提取,方法如下:将湿菌体移入离心管内,加入足量乙醇,混匀,300~500W超声处理8~10min后,离心,过滤,于滤液中得到所述辅酶Q10。
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