[发明专利]一种丁二酸酐化学修饰提高枯草芽孢杆菌Zj016氨肽酶稳定性的方法

权利要求书

1.一种丁二酸酐化学修饰提高枯草芽孢杆菌Zj016氨肽酶稳定性的方法，其特征在于：

A、丁二酸酐对氨肽酶的化学修饰方法

（1）称取20mg的氨肽酶粉溶解在15mL、0.05mol/L、pH8.5的Tris-HCl缓冲液中，然后向混合液中缓慢加入10mg的丁二酸酐SA，搅拌溶解，在整个反应过程中用2mol/L NaOH溶液维持反应体系的pH值为8.0，在4℃条件下反应1h，反应结束后，用0.05mol/L、pH8.5的Tris-HCl缓冲液在4℃透析过夜，以除去多余的修饰剂，得到丁二酸酐修饰的氨肽酶，修饰酶液简称SA-AE，4℃冰箱保存；

（2）称取20mg的氨肽酶粉溶解在15mL、0.05mol/L、pH8.5的Tris-HCl缓冲液中，用0.05mol/L、pH8.5的Tris-HCl缓冲液在4℃透析过夜，得到原酶液AE，4℃冰箱保存；

B、修饰前后酶的部分酶学性质

（1）采用丁二酸酐对氨肽酶在优化条件下进行化学修饰，SA对AE的平均氨基修饰率为55.86%，酶活保留率为105.81%；

（2）动力学参数Km：原酶液Km为1.0 mmol·L^-1，修饰酶液Km降低到0.75mmol·L^-1，说明修饰后氨肽酶液对底物的亲和力有明显的提高，最大反应速度Vmax均为2500mmol·L^-1·min^-1；

（3）原酶液和修饰酶液的最适温度：原酶液的最适温度为60℃，修饰酶液的最适温度提高到65℃；

（4）原酶液和修饰酶液的温度稳定性：修饰酶液70℃保温5h后仍然能保留70%以上的活性，原酶液70℃保温5h同等条件下的酶活残留率仅为35%；

（5）原酶液和修饰酶液最适pH：原酶液的最适pH为8.5，修饰酶液的最适pH提高到9.5~10.0；

（6）原酶液和修饰酶液的pH稳定性：以最高酶活的80%为界确定酶的pH稳定范围，原酶液在pH7.0~9.0范围内，酶活力较高且稳定，在相同条件下，修饰酶液在pH6.0~9.0范围内较稳定。