[发明专利]维生素B12化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.VB12化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：VB12抗体包被板、VB12酶结合物、VB12校准品、VB12质控品、20倍浓缩洗液、发光液A液和B液、样本处理液A液和B液。

2.根据权利要求1所述的VB12化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的VB12抗体包被板为包被有VB12抗体的96孔或48孔白色微孔板，白色微孔板的孔间平均变异不高于10%。

3.根据权利要求1所述的VB12化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的抗原酶结合物所用的酶为辣根过氧化物酶HRP，纯度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL。

4.根据权利要求1所述的VB12化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的VB12抗体纯度≥90%，效价不低于10⁵倍稀释。

5.根据权利要求1所述的VB12化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的VB12质控品包括低值质控品和高值质控品，其中低值质控品的浓度范围是158.68～238.02pg/mL，高值质控品的浓度范围是1141.37～1712.05pg/mL。

6.根据权利要求1所述的VB12化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的发光液A液中包含0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚；B液是浓度为0.675g/L过氧化脲水溶液；样本处理液A液包含36g/L NaOH；样本处理液B液包含10.66g/L MES，1.03g/L DTT，1g/L Proclin300，pH5.5。

7.根据权利要求1所述的VB12化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的20倍浓缩洗液包括75.5g/L Tris，120g/L NaCl，5mL/L Tween-20，1g/LProclin300。

8.一种制备所述权利要求1的试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）VB12抗体包被板的制备

将VB12抗体用0.05mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液稀释至1～10ug/mL，加入到白色微孔板中，37℃包被2小时；弃去孔内液体，用pH7.4PBS缓冲液洗板，然后加入含有0.5%BSA的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，37℃封闭2小时；弃去孔内液体，甩干后37℃烘干4小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2~8℃；

2）采用高碘酸钠氧化法制备VB12抗原-HRP酶结合物，并在酶结合物中加入HRP稳定剂，贴标签，储存于2~8℃；

3）VB12校准品

将VB12用1%BSA校准品稀释液配制成浓度分别为0，100，200，500，1000，2000pg/mL的校准品，贴标签，储存于2~8℃;

4）VB12质控品的配制：正常人血清经56℃水浴30min灭活和HBsAg、anti-HCV和anti-HIV检测呈阴性后，并加入Proclin300作为防腐剂。低值质控品和高值质控品，其浓度的平均值分别为198.35pg/mL和1426.71pg/mL；

5）配制发光液A液和B液

A液是含有0.7g/L鲁米诺和0.165g/L对碘酚的pH8.6的5mmol/LTris·HCl缓冲液；B液是浓度为0.675g/L的过氧化脲水溶液，用工艺用水配制；

6）配制20倍浓缩洗液

20倍浓缩洗液的配方如下：75.5g/L Tris，120g/L NaCl，5mL/L Tween-20，1g/LProclin300；

7）样本处理液的配制

样本处理液A包含36g/L NaOH；样本处理液B包含10.66g/L MES，1.03g/L DTT，1g/L Proclin300，pH5.5；

8）组装

将上述试剂组装成盒，储存于2～8℃；

9）对采用该方法制的的试剂盒的进行物理检查，准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品的测定值和稳定性进行测定。

9.根据权利要求8所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的包被板的固相载体为96孔或48孔的白色微孔板。