[发明专利]N末端B型脑钠肽前体化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.N末端B型脑钠肽前体化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：NT-proBNP抗体包被板、NT-proBNP抗体酶结合物、NT-proBNP校准品、NT-proBNP质控品、20倍浓缩洗液、发光液A液和B液。

2.根据权利要求1所述的NT-proBNP化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的NT-proBNP抗体包被板为包被有NT-proBNP抗体的96孔或48孔白色微孔板，白色微孔板的孔间平均变异不高于10%。

3.根据权利要求1所述的NT-proBNP化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体酶结合物所用的酶为辣根过氧化物酶，纯度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL。

4.根据权利要求1所述的NT-proBNP化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的NT-proBNP抗体纯度≥90%，效价不低于10⁵倍稀释。

5.根据权利要求1所述的醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于NT-proBNP质控品包括低值质控品和高值质控品，其中低值质控品的浓度范围是83.90～125.84pg/mL，高值质控品的浓度范围是6678.58～10017.90pg/mL。

6.根据权利要求1所述的NT-proBNP化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的发光液A液包含0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚；B液是浓度为0.675g/L的过氧化脲水溶液。

7.根据权利要求1所述的NT-proBNP化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的20倍浓缩洗液包括75.5g/L Tris，120g/L NaCl，5mL/LTween-20，1g/L Proclin300。

8.一种制备所述权利要求1的试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）NT-proBNP抗体包被板的制备

将NT-proBNP抗体用0.02M磷酸盐缓冲液稀释至1～10ug/mL，加入到96孔白色微孔板中，37℃包被2小时；弃去孔内液体，用pH7.4PBS缓冲液洗板，然后加入含0.5%BSA的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，37℃封闭2小时；弃去孔内液体，甩干后于37℃烘干4小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2～8℃；

2）采用高碘酸钠氧化法制备NT-proBNP抗体-HRP酶结合物，并在酶结合物中加入HRP稳定剂，于2~8℃下储存；

3）NT-proBNP校准品

将NT-proBNP抗原用校准品稀释液配制成浓度分别为0，40，200，1000，5000，20000pg/mL的校准品，贴标签，储存于2~8℃；

4）NT-proBNP质控品的配制：在正常人血清中加入适量的NT-proBNP纯品，配制低值质控品（QcL）和高值质控品（QcH），其浓度的平均值分别为104.87pg/mL和8348.22pg/mL；

5）配制发光液A液和B液

A液是含有0.7g/L鲁米诺和0.165g/L对碘酚的pH8.6的5mmol/LTris·HCl缓冲液；B液是浓度为0.675g/L的过氧化脲水溶液，用工艺用水配制；

6）配制20倍浓缩洗液

20倍浓缩洗液的配方如下：75.5g/L Tris，120g/L NaCl，5mL/L Tween-20，1g/L Proclin300；

7）组装

将上述试剂组装成盒，储存于2～8℃；

8）对采用该方法制的的试剂盒的进行物理检查，准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品的测定值和稳定性进行测定。

9.根据权利要求8所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的包被板的固相载体为96孔或48孔的白色微孔板。