[发明专利]定量检测人乳腺癌特异性基因1 mRNA表达水平的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种定量检测人乳腺癌特异性基因1mRNA表达水平的试剂盒。 

背景技术

乳腺癌作为一种常见的恶性肿瘤，严重威胁女性的生命和健康。因地理环境、生活习惯等的不同，乳腺癌在世界各国的发病率有很大差异，北美和北欧的大多数国家为高发区，南美和南欧一些国家为中等，亚洲、拉丁美洲和非洲的大多数国家为低发区。在北美、两欧等发达国家，女性乳腺癌的发病率居女性恶性肿瘤发病率的首位。据美国癌症协会估计，美国每年有12万乳腺癌新发病例，发病率为72.2/10万。我国虽属世界上女性乳腺癌的低发区，但近年来乳腺癌的发病率明显增高。我国各地区乳腺癌的发病率也不相同，沪、京、津及沿海地区是我国乳腺癌的高发地区，2006年我国乳腺癌发病率为52/10万，居女性恶性肿瘤中的第一位。 

乳腺癌的治疗方法有多种，如外科手术切除、放射治疗、化学治疗等。目前，手术切除为乳腺癌综合治疗方法中的首选，然而在手术切除技术已达到相当成熟和普及的同时，乳腺癌切除后的高复发和转移率已成为阻碍乳腺癌患者生存期提高的主要原因。手术前乳腺癌细胞由于自然或侵袭性医源性因素脱落至外周血并随血液转移至乳腺外，形成循环肿瘤细胞，但是由于受检测方法灵敏度及特异性较低的限制，该微量的癌细胞未能被检测到，这些癌细胞随血液到达外周组织并处于休眠状态，当患者机体免疫功能下降时，如大手术或移植后应用抗排斥免疫抑制剂等，休眠的癌细胞就有可能被激活，随血液循环返回到乳腺，并在乳腺内恢复增殖，从而导致了乳腺癌的复发。肿瘤的转移是临床治疗的一大难题，也是肿瘤致死的一个重要原因。目前，肿瘤转移的发现和确定，主要根据影像学（X线、CT、磁共振、PET等）或病理形态来诊断。影像学检查中，病灶或转移灶需要形成一定大小才能够被仪器成像和有效分辨；病理形态检查中，需要取到合适的检测标本，且有相当数量可观察到的肿瘤细胞存在。因此，无论是影像学诊断还是病理学诊断，都是肿瘤形成及转移后晚期、存在大量恶变细胞积累的阶段，如果在肿瘤发生转移的早期，能够发现并确定其转移，则可以指导临床治疗方案的设计，并提供有力的预后依据。血行播散是肿瘤转移的主要途径之一，所以在肿瘤患者外周血中进行肿瘤细胞基因表达、肿瘤特异性标记产物检测是了解肿瘤转移情况的一种有效方法，对肿瘤形成及转移的诊断具有极大的帮助，但是在肿瘤转移发生的早期，外周血中的肿瘤细胞一般很少，无法完全依赖病理形态检查，未形成转移灶或转移灶未达到一定体积时，影像学诊断也无能为力，因此，循环血中的微量肿瘤细胞基因表达和一些特异性产物检测的研究，引起了学者们的广泛关注。 

循环肿瘤细胞中特异性基因mRNA的定量测定，有利于肿瘤的早期诊断，治疗方案的确定以及预后的判断。随着分子生物学技术的飞速发展及其在医学研究中的广泛应用，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测外周血中微量肿瘤细胞已成为可能并被尝试。 

实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入一对引物的同时加入一个特异性荧光探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程。目前常用的TaqMan荧光探针为寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，故检测不到荧光；在PCR扩增过程中，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。在PCR扩增过程中，每个循环结束后检测一次荧光强度，整个反应结束后，便可得到一条工作曲线，根据该曲线可对未知模板进行定量分析。实时荧光定量PCR技术是一种能够准确定量mRNA的检测方法，通过检测肿瘤特异性基因mRNA的表达以判断循环肿瘤细胞的存在。 

乳腺癌特异性基因1(Breast cancer-specific gene 1,BCSG1)是一种特异性的在乳腺癌中选择性表达的基因，其定位于人类染色体10q23，DNA长度约5kb。BCSG1基因编码合成1条含127个氨基酸的蛋白，其在乳腺癌组织中特异性表达，在正常乳腺或良性乳腺病变中几乎不表达，是一种与乳腺癌进展有关的肿瘤标记物。正常人外周血BCSG1 mRNA呈阴性；游离于细胞外的mRNA很不稳定，极易被RNA酶解，故在外周血中若测得BCSG1 mRNA，则提示血循环中存在有完整的乳腺癌细胞。因此，BCSG1 mRNA是一项较好的血源性乳腺癌细胞的监测指标。 

检测乳腺癌患者骨髓及血中的BCSG1 mRNA对判断乳腺癌的发生、转移、复发，治疗效果评价及病情的动态观察具有重要意义，但目前尚没有合适的阳性率高的检测技术。 

发明内容