[发明专利]一种扩增未知序列的半随机PCR技术及其引物和试剂盒

权利要求书

1.一种寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸序列从5’端到3’端依次为：12～30个固定碱基，3～8个全简并的碱基N和3～7个固定碱基，其中所述N为：A或G或C或T。

2.如权利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸的序列如序列表中SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

3.一种PCR步移扩增基因的试剂盒，其特征在于，所述PCR步移扩增基因的试剂盒包括如权利要求1所述的寡核苷酸。

4.如权利要求3所述的PCR步移扩增基因的试剂盒，其特征在于，所述PCR步移扩增基因的试剂盒还包括dNTP，MgCl₂，10×PCR缓冲液和TaqDNA聚合酶。

5.一种PCR步移扩增基因的方法，其特征在于，所述PCR步移扩增基因的方法以权利要求1所述的寡核苷酸为引物，以目标DNA为模板，进行PCR扩增反应，所述PCR扩增反应的体系包括：权利要求1所述的寡核苷酸0.2～3μmol/L，0.2～1mmol/L dNTP，1.5～3mmol/L的Mg²⁺，Taq DNA聚合酶0.02～1U/μL，模板核苷酸的添加量为20～1000ng；所述PCR扩增的反应程序包括：

（1）92～95℃，变性3～6分钟；

（2）92～94℃，变性30～45秒；

（3）52～64℃，退火30秒；

（4）72℃延伸2分钟，步骤（2）～（4）重复30～45个循环；

（5）70～75℃延伸120～300秒；

（6）产物于4℃保存。

6.如权利要求5所述PCR步移扩增基因的方法，其特征在于，所述PCR步移扩增基因的方法的反应体系包括：0.5μmol/L权利要求1所述的寡核苷酸，0.2mmol/L dNTP，1.5mmol/L Mg²⁺，0.02U/μL Taq DNA聚合酶和20~500ng模板。

7.如权利要求5所述PCR步移扩增基因的方法，其特征在于，所述所述PCR步移扩增基因的程序包括：

（1）95℃变性5分钟；

（2）94℃变性30秒；

（3）56℃退火30秒；

（4）72℃延伸2分钟，步骤（2）～（3）重复30个循环；

（5）72℃，延伸300秒；

（6）产物于4℃保存。