[发明专利]一种用于HPLC测定丝瓜种子内源激素含量的样品前处理方法

权利要求书

1.一种用于HPLC测定丝瓜种子内源激素含量的样品前处理方法，其特征在于，其处理步骤包括：

1）制备待测丝瓜种子植物激素粗提液；

2）浓缩粗提液后，再加入3 ml 、pH=8.0、0.1mol/L磷酸缓冲溶液；

3）冷冻去脂，过滤除杂；

4）用0.5 mol/L稀盐酸调解至pH=3.0~3.5，再用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并酯相；

5）将酯相浓缩后，用流动相定容至1 ml，经0.45 μm的微孔滤膜过滤，用于HPLC分析。

2.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述待测丝瓜种子植物激素粗提液的制备方法为：准确称取1.000 g去除外种皮的丝瓜种子，在液氮条件下研成粉末，并装入10ml带盖离心管中，加入6 ml的冷乙腈，密封放入4℃冰箱浸提24 h，10000 r/m低温离心10 min取上清液，再向残渣中加入4 ml的冷乙腈低温超声振荡1 h，10000 r/m离心10 min取上清液，重复提取2次，合并3次上清液。

3.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述步骤2）及步骤5）中的浓缩方法是指将步骤1）制备的丝瓜种子植物激素粗提液或步骤4）所得的酯相在35 ℃下用氮气吹干。

4.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述步骤3）中冷冻去脂，过滤除杂的方法为：将步骤2）所得溶液放入-80 ℃超低温冰箱中冰冻30 min，然后在4℃条件下解冻，10000 r/m低温离心15 min，过滤弃去杂质即可。