[发明专利]一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及甲型肝炎病毒的检测，具体是一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法。

 

背景技术

甲型肝炎(hepatitis A，简称HA)的病原体是甲型肝炎病毒(HAV)，为直径27nm的小RNA病毒(picornavirus)。病毒存在于病人的粪便、血清、胆汁与肝细胞浆中，在体外抵抗力强，60℃加热4小时不死；能耐受pH 3.0的环境；在低温下能长期存活。实验证明，HAV对乙醚、60℃加热1小时及pH3的作用均有相对的抵抗力(在4℃可存活数月)。但加热100℃5分钟呈用甲醛溶液、氯等处理，可使之灭活。非离子型去垢剂不破坏病毒的传染性。

甲型肝炎病毒主要通过粪-口途径传播，传染源多为病人。甲型肝炎的潜伏期为15～45天，病毒常在患者转氨酸升高前的5～6天就存在于患者的血液和粪便中。发病2～3周后，随着血清中特异性抗体的产生，血液和粪便的传染性也逐渐消失。HAV随患者粪便排出体外，通过污染水源、食物、海产品(如毛蚶等)、食具等的传播可造成散发性流行或大流行。也可通过输血或注射方式传播。感染后血清中抗-HAV IGM抗体很快出现，在两周左右达高峰，然后逐渐下降，在8周之内消失，是HAV急性感染和近期感染的血清学证据；抗-HAV IgG抗体产生较晚，在急性期后期和恢复期早期出现(IgM开始下降时，IgG逐渐上升)属保护性抗体，在恢复期达高峰，可持久存在，可保护人体不再次感染，对甲肝流行病学调查、健康体检、了解易感人群有重要意义。

目前对甲型肝炎病毒检测的主要方法是甲型肝炎病毒特异性抗体检测。检测甲型肝炎病毒IGM判定是否为现症感染，检测IgG判定是否曾经感染过，免于再次感染。检测两种抗体有利于对被检对象的进行全面的判定。目前甲型肝炎病毒抗体的检测方法主要是RIA、ELISA等检测方法。在胶体金的检测方法中，有单独检测甲型肝炎病毒IgM或IgG的报道，但用胶体金类免疫层析技术同时检测甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体的检测试剂盒未见报道。和用两种试剂分别检测IgM和IgG抗体相比，同时检测IgM和IgG抗体能减少检测人员的工作量，节约成本；同时减少采血量，减少患者的痛苦。

免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，在抗体检测方面己得到较为广泛运用，基本原理如下：利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线，通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。

 

发明内容

针对现有技术存在的上述问题和缺陷，本发明的目的是提供一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，以实现快速定性检测血清样本中的甲型肝炎病毒。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，包括：盒体、样品稀释液和检测试纸，所述检测试纸由塑料支撑板、上样垫、标记甲型肝炎病毒特异性的抗原VP1的胶体金垫、硝酸纤维素NC膜、检测线T1、T2、质控C线和吸样垫，且位于盒体内；其中：

所述塑料支撑板一端粘贴所述上样垫，所述上样垫的一端紧密压接含有标记甲型肝炎病毒特异性的抗原VP1的胶体金垫，胶体金垫一端紧密压接硝酸纤维素NC膜，硝酸纤维素NC膜包被有相互分离的检测线T1、检测线T2和质控C线，所述检测线T1为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗人IgM抗体，检测线为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗人IgG抗体，所述质控C线为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗甲型肝炎病毒VP1抗体，硝酸纤维素NC膜的另一端连接吸样垫形成试纸;其中所述的IgM和IgG抗体浓度为10~15ug/mL；

所述标本稀释液为含磷酸钠、磷酸氢钠及氯化钠的混合水溶液。

作为一种优选方案，所述的抗原甲型肝炎病毒特异性的主要抗原中VP1抗原，所述VP1抗原可以利用基因工程重组表达或在培养病毒中纯化。

作为一种优选方案，所述上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，所述吸样垫由吸水滤纸组成。