[发明专利]制备再生丝素蛋白的方法及其产品和应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，特别涉及制备再生丝素蛋白的方法，还涉及由该制备方法制得的再生丝素蛋白和应用。 

背景技术

蚕丝是天然大分子聚合物，天然桑蚕丝主要由蚕丝蛋白和丝胶组成。桑蚕丝核壳结构，外层包覆丝胶蛋白( Sericin)，内层为丝素蛋白( Silk Fibroin，简称SF)，其中丝素蛋白含量约为70%～80%。丝素蛋白主要由3种蛋白质成分组成，分别为350kd的H链蛋白、25kd的L链蛋白及30kd的P25蛋白，其中H链蛋白：L链蛋白：P25蛋白的摩尔比为6：6：l。H链蛋白为疏水性蛋白质，主要为丝纤维提供类结晶结构，决定丝线强度；L链蛋白为亲水性蛋白，弹性相对较强。丝素蛋白具有良好的亲和性，无毒、无污染、无刺激性、组织相容性好，应用于体内安全；具有良好的生物可降解性，可塑性强，可制成纤维、溶液、粉、膜以及凝胶等。所以它是用作药物载体的最佳原材料之一。 

但是蚕丝中的蛋白结构有的疏水片层结构（β-折叠片层），也含有α-螺旋结构及无规则卷曲。研究表明丝蛋白的α-螺旋结构及无规则卷曲比β-折叠片层结构能加速酶的降解。所以对于药物载体研究而言，丝素蛋白二级结构应以改造为β-折叠片层才能显著提高固定酶的酶稳定性。而天然丝素蛋白不溶于水，可溶于强酸强碱和一些中性盐（如锂、锶、钡的氯化物、溴化物、碘化物，以及硫氰酸盐和氯化锌）溶液，在强酸和强碱中丝素蛋白的生物活性很难得以较好保存，中性盐如锂锶钡的氯化物、溴化物、碘化物，以及硫氰酸盐对人体有危害，因此也不适宜用于降解丝素蛋白。 

因此，急需一种制备再生丝素蛋白的方法，丝素蛋白溶解性好，制得的再生丝素蛋白β-折叠片层比例升高。 

 发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供制备再生丝素蛋白的方法，其制备方法简单，丝素蛋白溶解性好，固定酶后有利于提高酶的稳定性。

为实现上述发明目的，技术方案为： 

制备再生丝素蛋白的方法，将脱胶蚕丝加入钙醇溶液，水浴溶解，离心去除悬浮杂质，透析，干燥，得再生丝素蛋白。

所述钙醇溶液为钙盐、醇与水的混合液或含水钙盐与醇的混合液。 

本发明中钙醇溶液为所述钙醇溶液为CaCl₂、醇与水摩尔比为1:2:8的混合液或Ca(NO₃)₂ 4H₂O与醇摩尔比为1:2的混合液，所述醇为甲醇或乙醇。 

优选的，所述钙醇溶液为CaCl₂、乙醇与水的摩尔比为1:2:8的混合液。 

优选的，加入所述钙醇溶液的量为钙醇溶液与脱胶蚕丝的重量比为100：2-10。 

本发明中，将脱胶蚕丝完全溶解即可，然后除去杂质，优选的，所述水浴溶解是在温度为50-70℃的水浴中溶解1-2小时；所述离心是5000rpm、离心10分钟；所述透析是将所述上清夜装入截留分子量为6000的透析袋，透析2-3天；所述干燥为真空干燥。 

本发明中脱胶蚕丝可以按照现有技术进行脱胶处理进行脱胶处理，优选为，取蚕丝，先用质量分数为0.1%-10%的十二烷基硫酸钠溶液，煮沸1小时，然后用去离子水冲洗，再用质量分数为0.1%-10% Na₂CO₃溶液，再煮沸1小时，然后用去离子水冲洗，干燥，得脱胶蚕丝。 

本发明的目的之二在于提供利用上述制备方法制得的再生丝素蛋白，技术方案为： 

利用所述方法制备的再生丝素蛋白。

本发明的目的之三在于提供再生丝素蛋白的应用，生物降解性好，能够提高酶的稳定性，技术方案为： 

所述再生丝素蛋白在酶固定化的载体中的应用。

本发明中可以用于各种酶的固定，如固定解除毒素的葡萄糖氧化酶，用于有机磷农药残留快速检测固定化的小麦酯酶，用于食品加工中的淀粉酶或脂肪酶等，优选为L-天冬酰胺酶。