[发明专利]缬酪肽片段及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种缬酪肽截短后的片段，该多肽片段具有刺激分泌胰岛素的作用，本发明同时还提供了上述多肽片段的制备方法。

背景技术

缬酪肽是一种二十五肽，由二十五个氨基酸通过肽键连接而成，最初在猪小肠中分离而得，目前主要应用于治疗消化系统的肿瘤中。

糖尿病是一种血液中的葡萄糖容易堆积过多的疾病。国外给它的别名为“沉默的杀手”（Silent Killer），特别是成人型糖尿病。四十岁以上的中年人染患率特别高，在日本，四十岁以上的人口中发病率占10%，即十人当中就有一位糖尿病患者，一旦患上糖尿病，将减少寿命十年之多，可能发生的并发症遍及全身。目前主要治疗糖尿病的药物都是促进胰岛素分泌的药物和直接补充胰岛素，但是这些药物要么效果不好要么会产生胰岛素抵抗性。所以寻找新的治疗糖尿病的药物一直在进行中。

发明内容

本发明提供了一种多肽片段，经检测后发现其为缬酪肽的截断后的片段，由缬酪肽3～25位的氨基酸残基组成，其氨基酸序列如下：YPVEHPDKFLKFGMTPSKGVLFY。

本发明同时还提供了如上所述的多肽在生物医药上被认可的经化学修饰后的多肽。

本发明提供了上述多肽的制备方法，包括以下步骤：（1）、将猪肠道洗净后浸入沸水中浸泡3～7分钟，浸泡完成后取出冷冻并剁碎，然后在0～10°C条件下用醋酸对肠道进行浸取后过滤得浸出液，用盐酸对浸出液中的浸出物洗脱并抽滤得耐热肠多肽；

（2）、将耐热肠多肽溶解于水中，加入抗氧化剂及足量异丙醇溶液，室温下充分静置后离心除去沉淀，然后再加入足量温度为-25℃～-15℃的异丙醇溶液并在-25℃～-15℃条件下充分静置后抽滤去除沉淀，将所得滤液的PH值调节为5.8～6.1，再在-25℃～-15℃条件下充分静置后抽滤得白色沉淀，将白色沉淀充分洗涤后即制得粗肽；

（3）、将步骤（2）中制得的粗肽溶解于醋酸溶液中制得肽溶液，将肽溶液过柱层析分离得到分离物，选取分离物中具有刺激胰腺分泌胰岛素功能的一份，将其冻干即得粗提取物；

（4）、将粗提取物溶解于碳酸氢铵溶液中并搅拌，离心后去除沉淀得上清液，将所得上清液过柱层析并采用PH值为8.0、浓度为0.02mol/L的碳酸氢铵溶液进行洗涤，洗涤后得到的洗涤物冻干，再将洗涤物经过两次高效液相色谱分离后，将分离物冻干即制得权利要求1所述氨基酸序列的多肽。

步骤（1）中醋酸的浓度为0.5mol/L，盐酸的浓度为0.2mol/L。

步骤（2）中抗氧化剂为硫二甘醇，添加量为1.2毫升；洗涤分两次进行，第一次洗涤选用异丙醇溶液，第二次洗涤选用乙醚溶液，第二次洗涤完成后将白色沉淀放入真空环境中使乙醚在真空中蒸发。

所述步骤（4）中的两次高效液相色谱分离中，第一次分离所用洗提液为0.1％的三氟乙酸水溶液，第二次分离所用洗提液为0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液。

本发明同时还提供了上述多肽及其药学上可接受的盐的用途，用于制造刺激胰腺分泌胰岛素的药物。

本发明提供的多肽以及其在生物医药上被认可的经修饰后的多肽，能够有效的刺激胰腺细胞分泌胰岛素，与目前的治疗糖尿病药物中采用最多的高糖相比，本发明提供的多肽的效果更明显。

附图说明

图1为本发明实施例1中的粗肽层析分离结果图；

图2为本发明实施例1中第二次高效液相色谱分离结果图；

图3为本发明提供的多肽的氨基酸序列图；

图4为本发明提供的胰腺刺激试验的实验结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做详细具体的说明。

实施例1

本实施例中采用以下制备步骤：

（1）、取30千克新鲜猪肠，将猪肠道洗净后浸入沸水中浸泡4分钟，浸泡完成后取出冷冻并剁碎，然后在5°C条件下用0.5mol/L的醋酸对肠道进行浸取后过滤得浸出液，然后用0.2mol/L的盐酸对浸出液中的浸出物洗脱并抽滤得耐热肠多肽约30克，耐热肠多肽的产率约为猪肠湿重的0.01%。