[发明专利]川明参组培快繁技术

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，主要是川明参的组织培养方法。

背景技术

川明参（Chuanminshen violaceum Sheh et Shan）是伞形科(Umbelliferae)川明参属植物，多年生草本，是我国特有单种属植物，为四川道地药材。沿四川中部、东部（金堂、简阳、巴中、阆中、南部）到湖北西部（宜昌、当阳）一狭长地带分布，以四川金堂、苍溪、阆中、巴中等最为集中。《中药志》(1959)、《四川中药志》等曾将川明参和明党参作为同一种植物收载，佘孟兰等对两种植物进行形态比较研究后认为，二者非同一种植物，因而建立川明参属，并认为二属应隶属于不同的族。陆胤等采用气相色谱-质谱法对稀有濒危单型属药用植物明党参、川明参及珊瑚菜根部挥发油的化学成分进行了聚类分析，定量阐明了这3 种植物所代表的三属间亲缘关系，认为川明参与珊瑚菜的亲缘关系较接近，而与明党参的亲缘关系较远。

川明参以干燥根入药，味甘、微苦、平，归肺、脾经，有润肺化痰，和中养胃等功效，主治肺热燥咳、阴虚劳嗽、干咳痰粘、气阴不足、烦热口干等症。川明参食用历史悠久，川明参作为食用味道鲜美，具有质嫩、粉足、汤鲜等优良特点，同时具有养生保健功能。由于川明参不仅药用价值高，而且在食用方面具有良好的开发价值和保健功能，市场潜力巨大，因为川明参作为药食两用产品的常年需求量较大，市场价格逐年高涨。

现阶段川明参多为人工栽培，栽培种源来自于野生植株驯化所产生的种子，种源来源繁杂，品质参差不齐。川明参种子野生性强，发芽率低而且发芽时间参差不齐，种子的保存时间短，出苗率不足30%，种子育苗用种量达到10kg~30kg/亩。发芽率低导致种苗不足和栽培成本高，种苗质量也难以保证，制约了川明参的规模化种植的发展和单位面积产值的提高。目前尚未有川明参组织培养和离体快繁技术。

因此，利用植物组织培养技术，实现川明参的组织快繁，在川明参的产业化方面具有重要的应用价值：（1）实现川明参种苗的工厂化标准生产，繁殖速度快，一年四季均可繁殖生产种苗，不受地域和气候影响；（2）快速良种选育与扩繁，对于优良植株进行快速扩繁，并在此基础上实现良种的快速选育，为规模化人工栽培提供优良种苗；（3）为川明参种质资源保存提供低成本技术手段。

发明内容

一种川明参组织培养方法，通过选取性状优良的川明参植株旺盛生长期的茎尖、幼嫩叶片以及新鲜幼嫩叶柄为外植体，经消毒处理、接种诱导形成愈伤组织，再经愈伤组织增殖、诱芽培养和生根培养，长成完整的川明参植株小苗，最后将完整小苗移栽至育苗基质中，培养成川明参种苗。

所述的川明参组织培养方法，其步骤如下：

1、外植体的选取与灭菌：选取川明参旺盛生长期的茎尖、幼嫩叶片以及新鲜幼嫩叶柄为外植体，以流水冲洗20~30min，再以75%酒精浸泡30s，以无菌去离子水冲洗3~5次，再将冲洗后的外植体置于0.1%~0.2%的升汞溶液中，浸泡灭菌10~15 min，以无菌去离子水冲洗2~3次，以无菌滤纸吸干表面水分，备用。

2、外植体接种：将步骤1中备用的外植体切成0.5cm~1cm的小块，接种于愈伤组织诱导培养基中，在恒温25±2℃，光照（2000lx）14h/d条件下进行培养，培养时间为20天~25天，在茎尖切口、幼嫩叶片切口周围、叶柄切口以及中间膨大处长出愈伤组织。

3、愈伤组织增值：将步骤2中得到的愈伤组织接种于愈伤组织增值培养基中，在恒温25±2℃，光照（2000lx）14h/d条件下进行培养，培养时间为15天~20天，长出淡黄色或乳白色致密愈伤组织。

4、丛生芽诱导：将步骤3中得到的愈伤组织切取为黄豆大小块状，接种于丛生芽诱导培养基中，在恒温25±2℃，光照（2000lx）14h/d条件下进行培养，培养时间为20天~30天，出现川明参丛生芽。

5、生根培养：将步骤4中得到的川明参丛生苗分株，转接至生根培养基中，在恒温25±2℃，光照（2000lx）14h/d条件下进行培养，培养时间为20天~25天，小苗基部长出灰白短根，继续培养长出完整根系。

6、植株移栽：移栽前，对含泥炭土、珍珠岩的育苗基质进行消毒，将步骤5中得到的带根完整小苗移栽至育苗基质中，于温室中雾化保湿条件下培养，直至小苗存活，长成正常川明参植株。

所述的川明参植株，为一年生或者2年生的处于生长期（11月~次年2月）的伞形科川明参属植物川明参（Chuanminshen violaceum）。