[发明专利]富含蜕皮激素的植物标准提取物的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于天然产物化学和健康产品领域，具体地说是一种富含蜕皮激素的植物标准提取物的制备方法及应用。

背景技术

蜕皮激素(ecdysterone)为天然存在的甾酮类化合物，其结构图如图1所示，主要是β-蜕皮激素(β-ecdysone)。也包括具有同样的以6-酮-7-烯-27-甾体为基本骨架的天然产物。蜕皮激素具有特殊的生理功能，是天然药物、保健食品、天然化妆品的活性有效物质。植物中蜕皮激素及其类似物的发现，为蜕皮激素的大量制备提供了天然资源。

目前，从植物中提取蜕皮激素的方法，多以水加热提取后，用乙酸乙酯等有机溶剂萃取，硅胶柱层析纯化。不仅提取率较低，而且操作繁复，成本较高，不适用于工业化生产。且产品常伴有乙酸乙酯和正丁醇等有机溶剂残留，不容易除去，不利于环保。

已公开或授权的有关蜕皮激素提取和应用的专利，只提供一种植物提取蜕皮激素的方法，均采用多种有机溶剂提取，产品只提供蜕皮激素的含量，未能建立标准提取物的制备与分析检测技术。例如，中国专利201010039119.1公布了一种从露水草中提取蜕皮激素的方法。该方法以水或乙醇（或甲醇）提取露水草根，提取液浓缩后碱化，用正丁醇-乙酸乙酯混合溶剂萃取，通过阴离子交换树脂纯化。该方法仅以露水草为原料，采用多种有机溶剂萃取，操作繁复，成本较高，不利于工业化生产和环保。

发明内容

本发明的目的是改变传统的用乙酸乙酯等有机溶剂萃取制备蜕皮激素的工艺，提供一种适于工业化生产的新方法，批量制备富含蜕皮激素的植物标准提取物以及它的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明的技术方案如下：

1、将富含蜕皮激素的植物原料加入10倍量的乙醇回流提取，共提取三次，每次1小时，过滤，合并滤液得乙醇提取液；

2、将乙醇提取液放置，冷却至室温，过滤，将滤液以一定流速通过D941大孔树脂层析柱，树脂与提取液的重量比为1:10-20 , 柱径高比为1:8-10，以含水低级醇洗脱，洗脱量为2-3BV，同时，用薄层层析法TLC检测指导洗脱，TLC的条件，展开剂：乙酸乙酯；显色剂：10 %硫酸乙醇液，收集富含蜕皮激素部位的洗脱液，浓缩至小体积，通过大孔树脂HPD-100层析柱，大孔树脂与样品的重量比为10:1-0.5，柱径高比为1:8-10，以含水低级醇梯度洗脱，用TLC法检测指导洗脱，TLC的条件为，展开剂：乙酸乙酯；显色剂：10 %硫酸乙醇液，收集富含蜕皮激素部位的洗脱液； 

3、将洗脱液减压浓缩，干燥，干燥方法可以冷冻干燥，也可采用真空干燥、加热干燥、喷雾干燥和减压干燥等。

按上述方法得到的产物为白色至类白色粉末，经HPLC（高效液相色谱）技术分析检测，为不同植物原料的不同规格的富含蜕皮激素的系列植物标准提取物。

富含蜕皮激素的植物原料来源于鸭跖草科植物珍珠露水草（Cyanotis arach-noidea C. B. Clarke）、苋科植物牛膝(Achyranthes bidentata Blume)。菊科植物漏芦（Rhaponticum uni-florum（L.） DC.），唇形科植物筋骨草（Ajuganipponensis Makino）等，及其同属植物。

所述的柱层析用的填充剂为大孔树脂，包括但不限于DM-130, D-941, D-2026, D-101, DA-201, D-1400, AB-8, CAD-40, CAD-45, ADS-5, HPD-500, HPD-100, 以及XAD-2，XAD-4，Diaion型号的树脂。

所述的柱层析分离用的洗脱剂，可以是水和低级醇，包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等中的一种低级醇。采用不同比例的水和低级醇混合溶剂进行梯度洗脱。需要根据对植物标准提取物的不同标准要求，以及具体的植物原料和投样量，优选合适的工艺参数，并应用TLC和（或）HPLC技术进行在线质量监测。

本发明所述的方法具有如下优点：仅用水和低级醇提取制备富含蜕皮激素的植物标准提取物, 得率高、制备过程简单易行、生产周期短、质量稳定可控、无毒、无三废污染，适宜于批量制备和工业化生产，应用该方法得到的提取物经HPLC指纹图谱检测相似度达99%以上。本发明提取用的低级醇，可回收使用。本发明使用的柱层析填充剂材料可以重复使用，生产成本低。