[发明专利]具有牛TLR4免疫应答功能的细胞模型及其构建方法

权利要求书

1.具有TLR4免疫应答功能的细胞模型，其特征在于将牛源MD2、CD14、TLR4不同的三个基因用2A序列连接、组装到载体上，将重组载体导入商品化细胞系中。

2.根据权利要求1所述的细胞模型，所述的商品化细胞系是HEK293。

3.根据权利要求1所述的细胞模型，所述的载体是pLEX-MCS载体。

4.权利要求1所述的细胞模型的构建方法，其特征在于包括扩增牛源MD2、CD14、TLR4序列，然后将所扩增的序列组装到载体上，并将载体导入到商品化细胞系中，选择同时表达MD2、CD14、TLR4的阳性细胞系。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于将牛源MD2、CD14、TLR4三个不同的基因用2A序列连接，使三个基因在细胞中同时独立表达。而且，MD2、CD14、TLR4基因编码序列的3’末端，均增加了HA基因序列标签，HA标签的编码序列为AgCgTAgTCTgggACgTCgTATgggTA；在扩增CD14和MD2的下游引物中增加能自行裂解的2A序列，在2A前后加入Linker序列tccactgcc，其中2A序列为gag ggc aga gga agt ctg cta aca tgc ggtgac gtc gag gag aat cct ggc cca，优选的，在所述引物中还包括限制性内切酶序列。

6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：设计扩增MD2基因CDS序列的引物，上游引物为：ccgtga atc atgttt cca ttt gtg ctt ttt tcc，下游引物为：gtttgg gcc agg attctc ctc gac gtc acc gca tgt tag cag act tcc tct gcc ctc tcc act gccagc gta gtc tgg gac gtc gta tgg gta gta att g；设计扩增CD14基因CDS序列的引物，上游引物为：cca ctc gag ctg act atg gtg tgc gtg ccctac ctg ctg，下游引物为：gtt acg cgt tgg gcc agg att ctc ctc gac gtcacc gca tgt tag cag act tcc tct gcc ctc tcc act gcc agc gta gtct gggacg tcg tat ggg tac gcg aag；设计扩增TLR4基因CDS序列的引物，上游引物为：gcc agg atg atg gcg cgt gcc cgc ctg gct gcggct ctg atc cc，下游引物为：ctt aat acc ggt tca agc gta gtc tgg gacgtc gta tgg gta ggt gga ggt tgt cgc ttc ttg cgg gttg。