[发明专利]一种优化的发酵高产几丁质酶的方法

权利要求书

1.一种优化的发酵高产几丁质酶的方法，其特征在于：用已保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC3483，保藏日期为2009年11月30日的一株高产几丁质酶的菌株Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1为出发菌株，对该菌株的种子培养基配方和产酶培养基配方进行优化研究，形成优化的发酵生产几丁质酶的方法，工艺为：

(1)种子培养

种子培养基：磷酸二氢钾0.75g/L，磷酸氢二钾0.32g/L，硫酸镁0.55g/L，七水硫酸亚铁0.02g/L，酵母浸出物4.2g/L，葡萄糖3g/L，蛋白胨4.2g/L；

挑经过活化的产几丁质酶菌落二环接种到盛有50ml种子培养基的250ml三角瓶中进行培养。培养条件：pH值：7.0，温度：30℃，摇床转速200rpm，培养时间：12h，即为发酵种子液；

(2)产酶培养

产酶培养基：果糖3.2g/L，玉米浆粉12g/L，磷酸二氢钾0.8g/L，磷酸氢二钾0.4g/L，硫酸镁0.5g/L，七水硫酸亚铁0.02g/L，几丁质粉粒1.5g/L；

以5％接种量，将发酵种子液250ml加入到含有5升产酶培养基的7L发酵罐中。发酵产酶条件：pH：7.5，温度：30℃，发酵时间：75小时，转速：400prm，通气量：1.5L/min/L；

(3)酶液提取及酶活力测定

发酵结束后，将发酵液用冷冻离心机离心，离心条件：6000rpm、4℃、10min，离心后，取上清液即为几丁质酶液，用酶活力测定方法测定酶活力；

(4)酶活的测定方法

取0.5ml上清液，加入pH＝6.5的1ml 0.1M醋酸-醋酸钠缓冲液，0.5ml0.5％的胶体几丁质，37℃保温30min，取出后加入DNS试剂0.5ml，沸水浴10min后，迅速用冰水冷至室温，6000rpm离心8min，530nm处比色，重复三次，取平均值作试验结果，同时以高温灭活的上清液同样处理作为对照，最后以OD₅₃₀的平均值来计算还原糖的含量，计算出酶活。酶活力定义为在上述条件下每分钟释放相当于1mmol NAG所需要的酶量为一个酶活单位。