[发明专利]水产养殖鲇鱼杂种的ITS2分子标记鉴定方法

说明书

 技术领域

本发明涉及鱼类杂种的分子标记鉴定方法，具体涉及水产养殖鲇鱼杂种的ITS2分子标记鉴定方法。

背景技术

鲇形目鱼类属肉食性底层鱼类，是鱼类进化中最发达的真骨鱼类之一。南方鲇（又叫大口鲇）（Silurus meridionalis Chen）和鲇（Silurus asotus Linnaeus）均属于鲇形目、鲇科、鲇属，两者味道鲜美、营养价值高，是我国各地主要养殖的高附加值经济鱼类。南方鲇分布于我国珠江、闽江、湘江、长江等水系，是一种大型凶猛的肉食性鱼类，具有生长快、个体大、抗病力强等特点，喜栖息于开敞水体，以及湾沱、河底砾石河段，怀卵量大，产卵期长。鲇分布于除青藏高原及新疆外的全国各水系，体色随栖息环境不同而有所变化，主要栖息于江河干流或较大的支流、大型湖泊和水库等水体的中下层，其适应性强，栖息于静水或缓流水域，个体较小，生长快。南方鲇和鲇形体轮廓相似，小个体的南方鲇与鲇成体混同杂居，大个体与鲇隔离生活。据报道，人工繁殖的南方鲇群体中雄性比例非常低。调查显示，当雄性南方鲇缺乏时，可能进行了雌性南方鲇与其他雄性鲇属种类的杂交，从而在鲇鱼生产中出现了物种间的杂交育种。

为了满足社会生产的需要，获得兼有以上2种鱼优良性状的苗种，王朝明等（大口鲇与鲇鱼的杂交试验，淡水渔业，2004，34（6）: 41~43；三种鲇遗传多样性的RAPD分析，淡水渔业，2005，35（4）: 14~17）开展了南方鲇与鲇的杂交育种试验，并做了一定的杂种鉴定工作，筛选出22个随机引物用于南方鲇、鲇及其杂交F₁代三个群体多样性分析，结果发现杂交F₁代继承了大口鲇的52条特征带和鲇的32条特征带。然而，其鉴定工作所采用的RAPD标记，受方法本身的限制，检测效率低且重复性不高，严重影响了这一方法的推广使用。此外，仅有龙华等（鲇、大口鲇及其杂交鲇血液生理生化指标比较及转铁蛋白等位基因分析，长江大学学报（自科版），2006，3（2）: 161~164； 鲇、大口鲇及其杂交鲇的血型分析，水利渔业，2007，27（3）: 19~20）对南方鲇、鲇及其杂交鲇的血液生理、血型分析及同工酶等方面的研究。可见，有必要开展南方鲇、鲇及其杂交子代的分子标记及鉴定技术研究，为南方鲇养殖和育种实践中的杂种鉴定提供可靠方法。

发明内容

本发明的目的为鉴定南方鲇与鲇的杂种，从分子生物学层面上将形态上不易区分的杂种和纯种进行分辨。本发明以南方鲇、鲇及其杂交子代作为研究对象，在鲇属鱼类中筛选设计了ITS2基因片段作为分子标记，应用所扩ITS2基因片段在南方鲇和鲇中的长度差异，成功鉴定了南方鲇、鲇及其杂交子代。

ITS基因片段是核糖体RNA转录间隔区的一部分，具有物种内保守，物种间变异大的特点。采用该方法用于南方鲇、鲇及其杂交子代的鉴定，具有实验快捷，操作简便，鉴定直观，无需测序的优点。

为实现上述发明目的，本发明采用如下的技术方案：

水产养殖鲇鱼杂种的ITS2分子标记鉴定方法，其特征在于：应用PCR扩增后的南方鲇的ITS2基因片段和鲇的ITS2基因片段存在长度差异，采用琼脂糖凝胶电泳鉴定南方鲇、鲇及其杂交子代。

所述的南方鲇的ITS2基因片段的核苷酸序列（SEQID NO:1）为：

CTCGTGCGTC GATGAAGAAC GCAGCCAGCT GCGAGAACTA ATGTGAATTG CAGGACACAT TGATCATCGA CACTTCGAAC GCACATTGCG GCCCCGGGTC CCTCCCGGGG CTACGCCTGT CTGAGGGTCG CTATTTCCAT CGATCGGGAA AAAAACGAAC CATACGCACG CGACTGGAAG CTCGCAGGCC GTCATCGGCC TTCGTCCTCC TAAAAGCAGA CGCTCTCTTT TTTCGTGTCG；

所述的鲇的ITS2基因片段的核苷酸序列（SEQID NO:2）为：