[发明专利]一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，涉及一种用于检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其试剂盒。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，是威胁女性健康的“头号杀手”。随着人们生活方式的改变，乳腺癌的发病率也呈逐年递增之势。每年全球约有140万女性罹患乳腺癌，更有40万女性死于乳腺癌。根据美国癌症协会2012发布的美国癌症统计预期数据来看，乳腺癌高居女性恶性肿瘤发病率第一位，占所有新发女性恶性肿瘤的29％。在我国，近年来乳腺癌发病率也呈逐年递增的趋势。从1982年到2001年，女性乳腺癌发病率增加了91％。近期北京、上海、天津等大城市的统计数据显示，乳腺癌已成为我国女性最常见的恶性肿瘤，且发病率呈逐年上升趋势，每年新增打3％-4％，超过世界水平1-2％，每年有20余万妇女患乳腺癌，发病率为女性易患肿瘤第一位。

目前，乳腺癌的预警和早期诊断技术主要有以下几种：第一种为定期接受临床体格检查，但是乳腺癌的普查耗资较大，成本高，在我国乳腺癌的早期发现主要着眼于自我检查，当患者发现肿块而就诊时，常常为时已晚；第二种为影像学诊断法，以钼靶X射线摄片为主要手段，以超声波扫描和MRI扫描为辅助，一般可检测表现为肿瘤病变的微小钙化，但是对于不典型的病变，如致密型乳腺内的病变及近胸壁的病变易发生漏诊，且对检测仪器的要求高，耗时，费用高；第三种为生物靶标早期检测，如乳腺癌相关基因的突变分析，血清中肿瘤标志物的测定，由于基因的突变或异常表达通常早于病变的发生，可实现早期预警，且检测方法简单，快速，价格较低。因此，发展生物靶标检测，寻找新的乳腺癌检测靶标作为临床检测且简单实用的技术对于乳腺癌患者提前预警及采用有效的治疗手段意义重大。

HER2基因(人表皮生长因子受体2基因)又称neu或c-rbB-2基因，是一种原癌基因，位于17号染色体长臂上，编码185KD跨膜蛋白，具有酪氨酸激酶活性，属于人类表皮生长因子受体(EGFR)家族。研究表明，HER2在20％-30％的原发性乳腺浸润性导管癌中有基因的扩增和蛋白的过度表达。乳腺肿瘤患者HER2阳性意味着乳腺肿瘤细胞表面的HER2蛋白数量增多，过度传递信号，刺激癌细胞疯狂增殖。HER2阳性的患者同其他乳腺癌病人相比，肿瘤恶性程度更高，进展更快，更容易复发和远处转移，且此类病人通常对内分泌治疗不敏感，预后较差。因此，精确检测HER2的表达对于乳腺癌的早期诊断、预后及个性化治疗等方面具有重要的意义。

量子点(Quantum dots，DQs)是一类大小在1-10nm，半径小于或接近于激子玻尔半径的新型半导体纳米晶体，作为一种应用于生物医学领域的新型纳米荧光材料探针，能克服传统有机荧光染料的不足，具有激发光谱窄、连续，检测灵敏度高，抗漂白能力强，荧光强度高而稳定，生物相容性好，不易受组织自发荧光干扰等优点。现有技术中采用的量子点检测方法一般为用量子点直接与抗体结合制作成探针，实现多抗原同时标记，此方法成本较高，探针保存时间短，需对量子点进行标记，不适合常规临床检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其试剂盒，实现对HER2基因表达量经济、快速、灵敏的检测。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种检测乳腺癌HER2基因表达量的量子点免疫荧光试剂盒，所述的试剂盒中包括：

(1)抗体稀释缓冲液；

(2)孵育缓冲液；

(3)联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体的溶液；

(4)无镉量子点的水溶液；

所述的抗体稀释缓冲液为磷酸与NaCl混合配置的磷酸-NaCl缓冲液；

所述的孵育缓冲液为磷酸、NaCl和胎牛血清混合配置的磷酸-NaCl-胎牛血清溶液。

优选地，所述的无镉量子点为ZnSe/ZnS核/壳量子点，激发波长为365nm。

优选地，所述的抗体稀释缓冲液中磷酸与NaCl的摩尔比为1∶1。

优选地，所述的抗体稀释缓冲液中磷酸与NaCl的浓度相同，且为0.0.1-0.03mol/L。

优选地，所述的孵育缓冲液含有5％-20％的胎牛血清。

优选地，所述的联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体溶液浓度为1×10^-6mol/L-2×10^-6mol/L。

本发明还提供了一种用所述的试剂盒检测乳腺癌HER2基因表达量方法，具体步骤如下：

(1)用抗体稀释缓冲液稀释联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体的溶液；