[发明专利]鸭坦布苏病毒弱毒株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及病毒技术领域，尤其涉及一种由鸭坦布苏病毒强毒株经传代培养使其致病力减弱的鸭坦布苏病毒弱毒株，以及该弱毒株用作鸭坦布苏病毒病的活疫苗、灭活疫苗及诊断抗原的应用。 

背景技术

2010年4月以来，我国上海、浙江、江苏等地发生了以肉鸭生长迟缓和蛋鸭产蛋急剧下降为特征的一种传染病，短短几个月时间里，南方各省几乎所有的蛋鸭场都受到了该病的侵袭，给养鸭业造成了巨大的经济损失。国内的研究者通过病毒分离鉴定，病毒基因组序列分析，动物回归试验等实验证明该传染病是由一种新的黄病毒——鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus，DTMUV)所引起，该病毒属于黄病毒属Ntaya病毒群。该病毒自发现以来，在我国迅速传播，广泛流行。2010-2012年，该病毒在上海、浙江、江苏、安徽、河南、山东、湖南、湖北、福建、河北等地鸭群中均被检测到。 

鸭坦布苏病毒病为新发传染病，具有高度传染性，且一年四季都可流行，给鸭坦布苏病毒病的防控带来了极大的困难，目前，尚无有效的防控措施，更没有疫苗可用，也没有有效、快速简便的血清学检测方法。 

发明内容

本发明要解决目前没有有效的防控鸭坦布苏病毒病的疫苗的技术问题，提供一种鸭坦布苏病毒弱毒株，该弱毒株可用于制备预防鸭坦布苏病毒病的活疫苗或灭活疫苗。 

此外，还需要提供一种上述鸭坦布苏病毒弱毒株的应用，用于制备检测鸭坦布苏病毒抗体的诊断抗原，可快速、灵敏地检测出鸭坦布苏病毒。 

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现： 

在本发明的一个方面，提供了一种鸭坦布苏病毒弱毒株，该弱毒株是由鸭坦布苏病毒强毒株FX2010经突变获得，所述突变至少包含以下5个氨基酸突变位点：第407位D突变为N、第599位V突变为A、第636位M突变为K、第1050位V突变为A、和第1820位T突变为I。 

本发明的鸭坦布苏病毒弱毒株，是由鸭坦布苏病毒强毒株FX2010经鸡胚成纤维细胞(CEF)连续培养传代而获得。当鸭坦布苏病毒强毒株FX2010在CEF上传代培养到第60代病毒(FX2010-60P)时出现上述5个氨基酸突变位点，即包括第407位(D突变为N)、第599位(V突变为A)、第636位(M突变为K)、第1050位(V突变为A)和第1820位(T 突变为I)，经试验证明这5个氨基酸位点的突变使鸭坦布苏病毒对鸭的致病力减弱，即FX2010-60P的毒力比其母源毒株FX2010弱。 

鸭坦布苏病毒强毒株FX2010在CEF上传代培养到第80代病毒(FX2010-80P)时，与FX2010-60P相比新增1个氨基酸突变位点，即第442位(Y突变为F)。这个位点的突变使鸭坦布苏病毒FX2010-80P对鸭的致病力减弱，即FX2010-80P的毒力比FX2010-60P弱。 

鸭坦布苏病毒强毒株FX2010在CEF上传代培养到第100代病毒(FX2010-100P)时，与FX2010-80P相比新增2个氨基酸突变位点，即第376位(E突变为G)和第444位(A突变为V)。这2个位点的突变使鸭坦布苏病毒FX2010-100P对鸭的致病力减弱，即FX2010-100P的毒力比FX2010-80P弱。 

鸭坦布苏病毒强毒株FX2010在CEF上传代培养到第130代病毒(FX2010-130P)时，与FX2010-100P相比新增3个氨基酸突变位点，即第993位(K突变为R)、第2227位(V突变为A)和2316位(F突变为Y)。这3个位点的突变使鸭坦布苏病毒FX2010-130P对鸭的致病力减弱，即FX2010-130P的毒力比FX2010-100P弱。 

鸭坦布苏病毒强毒株FX2010在CEF上传代培养到第145代病毒(FX2010-145P)时，与FX2010-130P相比新增2个氨基酸突变位点，即第226位(A突变为V)和第2378位(S突变为L)。这2个位点的突变使鸭坦布苏病毒FX2010-145P对鸭的致病力减弱，即FX2010-145P的毒力比FX2010-130P弱。