[发明专利]一种同时鉴别食品中猪牛羊鸡四种成分的试剂盒及应用

权利要求书

1.一种基于半巢式-多重PCR的同时鉴别食品中猪牛羊鸡四种肉类成分的试剂盒，其特征是由以下试剂构成：

（1）预混液1：含引物SIM1 0.4 μM，引物SIM2 0.4 μM，Taq酶1.25 U，dNTP各0.2 μM，PH8.5的Tris-HCl 10 mM，KCl 50mM，MgCl₂ 1.5 mM，预混液1储藏条件为4 oC，保质期半年；

（2）预混液2：含引物SIM1 0.4μ M，引物P 0.4 μM，引物C 0.4 μM，引物B 0.4 μM，引物S 0.4 μM，Taq酶1.25 U，dNTP各0.2 μM，PH8.5的Tris-HCl 10 mM，KCl 50mM，MgCl₂ 1.5 mM，溴酚蓝5%v/v，预混液2储藏条件为4oC，保质期半年。

2.权利要求1所述试剂盒用于深加工食品中肉类成分的种属鉴定方法，其特征是由以下步骤构成：

（1）将从肉松、火腿肠深加工食品中提取的总DNA 1 μL与19 μL本试剂盒中的预混液1在冰上混合均匀后，于普通PCR仪上进行第一轮扩增反应，反应条件如下：95 oC 预变性3 min，20个循环的95 oC 30 s、54 oC 30 s、72 oC 40 s，最后72 oC 延伸7 min；

（2）取2 μL反应产物，与48 μL本试剂盒中的预混液2在冰上混合均匀后，于普通PCR仪上进行第二轮扩增反应，反应条件如下：95 oC 预变性3 min，30个循环的95 oC 30 s、52 oC 30 s、72 oC 40 s，最后72 oC 延伸7 min；

（3）取10 μL反应产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，使用100 bp至1000 bp的DNA分子量标准作为对照，将凝胶在紫外灯下观察、拍照，根据特异性条带的分子量大小对食品中四种肉类的种属进行同时鉴定，鸡、牛、羊、猪的特异性条带大小分别为216 bp，263 bp，322 bp 和387 bp。

3.权利要求1所述试剂盒在现有PCR、荧光定量PCR方法无法鉴别肉类种属的深加工食品进行检测或肉类掺假鉴别中的应用。