[发明专利]一种硫酸鱼精蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说涉及以适宜的鱼类新鲜成熟精子为原料，提取硫酸鱼精蛋白的工艺方法。

背景技术

1.硫酸鱼精蛋白的作用

1)硫酸鱼精蛋白体外循环心脏手术中不可或缺的、无法替代的对抗肝素的药物，在心脏手术结束时，患者需要使用硫酸鱼精蛋白，以解除抗凝，防止大出血，是必备的“救命药”、“救心药”。

2)硫酸鱼精蛋白与胰岛素结合，延迟胰岛素释放，从而延长胰岛素的降血糖作用，用来制造长效胰岛素。

3)强壮和辅助治疗男性不育。国内外研究结果表明，硫酸鱼精蛋白中的DNA能促进细胞活化、强化生殖能力；精氨酸刺激垂体释放性腺激素的作用。此外，硫酸鱼精蛋白中含有较高的锌，锌盐可使血浆睾酮水平与精子数目成倍增加。因此硫酸鱼精蛋白DNA、精氨酸、锌协同作用，治疗因精子分泌不足和精子缺乏引起的男性不育症。

4)此外，硫酸鱼精蛋白是一种广谱、高效、安全的新型天然食品防腐剂。

2、硫酸鱼精蛋白传统生产工艺

硫酸鱼精蛋白的传统生产工艺，在鱼的精子中，鱼精蛋白通常以核酸-蛋白质的形态存在。即核蛋白结合键宽松不固，甚至易分开，所以可用硫酸使其分离，制成鱼精蛋白硫酸盐，反应式如下：

核酸-蛋白质+H₂SO₄→鱼精蛋白SO₃+核酸+H₂0

利用硫酸鱼精蛋白溶于水、不溶于乙醇，以及耐高温的特性，而核酸微溶于水，不耐高温的特性，联合采用3体积％的硫酸提取、80-85℃温水提取、0℃低温处理以及有机溶剂乙醇沉淀生化技术，从而实现从鱼精子中将鱼精蛋白与核酸分离，纯化得到硫酸鱼精蛋白，硫酸鱼精蛋白成品效价能够达到135iu/mg。

《中国药典》2010年版提高硫酸鱼精蛋白的质量标准，增加了比旋度(-65°至-85°)指标要求。采用传统的生产工艺，其比旋度仅能达到-30°，已不能满足新药典对硫酸鱼精蛋白的质量要求。

发明内容

本发明的目是提供了一种硫酸鱼精蛋白的制备方法。

具体地，本发明的目的是提供了一种能够提高硫酸鱼精蛋白比旋度的方法。

本发明采用以下工艺方案予以实现上述目的：

鲑鱼的鱼精，粉碎，加水提取，过滤，滤液加乙醇沉淀，得到硫酸鱼精蛋白粗品，粗品再经下述操作：

(1)硫酸提取工序

硫酸鱼精蛋白粗品中，按1：2-1：7的比例加入3％硫酸溶液，搅拌2-3小时，过滤，取滤液；

滤液按体积1：3-1：6的比例加乙醇，沉淀12小时后，过滤，固体称重；

(2)升温提取工序

按重量的1：2-1：8的比例加入水搅拌溶解，溶液加热至50～79℃，保温20～30分钟，过滤取滤清液，量取滤液体积。按1：3-1：6的比例加乙醇沉淀，下层沉淀物称重；

按重量1：2-1：8的比例加水溶解，用氢氧化钠溶液调节pH：7.0-13.0，然后溶液加热50～79℃，保温20～30分钟，过滤，取滤液；

(4)低温析出工序

滤液2-15℃低温处理，12小时后，倾去上层清液，析出油状物，称其重量；

(5)干燥工序

按重量1：2-1：8的比例加水溶解，溶解后，用硫酸调节pH：1.0-6.0，按1：3-1：6的比例加乙醇沉淀。12小时后，弃去上层乙醇，沉淀物用无水乙醇洗涤，2-3次，用五氧化二磷作吸水剂，真空干燥，干燥后即得精制品；

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果：

本发明在传统生产工艺的基础上，采用2体积％-10体积％硫酸提取、50-79℃温水提取、乙醇沉淀、以及2-15℃处理四种生化技术，从鲑鱼中提纯得到硫酸鱼精蛋白。与传统工艺相比，新生产技术的创新之处在于，工艺简单，成本低，过程温和，制得的硫酸鱼精蛋白的比旋度能够达到-72.0°，满足《中国药典》2010年版的标准要求，同时，效价升高至约155iu/mg。

具体实施方式

实施例1：

鲑鱼的鱼精，粉碎，加水提取，过滤，滤液加乙醇沉淀，得到硫酸鱼精蛋白粗品，粗品再经下述操作：

(1)硫酸提取工序

硫酸鱼精蛋白粗品300.5g中，加入3体积％硫酸溶液601ml，搅拌2小时，过滤，取滤液；