[发明专利]点状掌跖角化病的致病基因及其用途

权利要求书

1.突变的COL14A1基因，其与SEQ ID NO:1相比具有至少1个非沉默突变，并且所述突变的COL14A1基因编码与野生型COL14A1蛋白相比，功能异常（例如丧失了功能）的蛋白，或导致PPPK的发生；

例如，所述非沉默突变选自添加，缺失和置换中的一种或多种；

例如，所述非沉默突变位于COL14A1基因的外显子区域；

例如，所述非沉默突变位于COL14A1基因的第37个外显子；

例如，所述非沉默突变位于：c.4505；

例如，所述非沉默突变是：c.4505C→T。

2.一种载体，其包含权利要求1的突变的COL14A1基因；

例如，所述载体选自克隆载体和表达载体；

例如，所述载体还包含与所述突变的COL14A1基因可操作地连接的表达控制序列，例如但不限于启动子，增强子和终止子；

例如，所述载体还包含选择标记。

3.一种宿主细胞，其包含权利要求1的突变的COL14A1基因或权利要求2的载体。

4.权利要求1的突变的COL14A1基因或权利要求2的载体或权利要求3的宿主细胞的用途，其用于产生PPPK动物模型，或用于制备试剂盒，所述试剂盒用于产生PPPK动物模型。

5.诊断受试者是否患有PPPK或处于发展PPPK的风险中的方法，其包括，

1)获得来自所述受试者的核酸样品(例如，基因组DNA样品或总mRNA样品)；

2)在所述核酸样品中确定COL14A1基因中是否存在导致COL14A1基因编码功能异常的蛋白的非沉默突变；和

3)如果存在所述非沉默突变，则判断受试者患有PPPK或处于发展PPPK的风险中；

例如，所述非沉默突变选自添加，缺失和置换中的一种或多种；

例如，所述非沉默突变位于COL14A1基因的外显子区域；

例如，所述非沉默突变位于COL14A1基因的第37个外显子；

例如，所述非沉默突变位于：c.4505；

例如，所述非沉默突变是：c.4505C→T。

6.用于诊断PPPK的诊断剂，其包含能够特异性扩增COL14A1基因或其片段的引物，或能够特异性检测COL14A1基因突变的探针，或能够特异性识别突变的COL14A1蛋白的抗体或其抗原结合片段；

例如，所述引物能够特异性扩增COL14A1基因的外显子，优选第37个外显子；

例如，所述引物的序列选自SEQ ID NO:73和74；

例如，所述引物是如SEQ ID NO:73和74所示的引物对；

例如，所述COL14A1基因突变位于COL14A1基因的外显子，优选第37个外显子，更优选地位于：c.4505；

例如，所述COL14A1基因突变是c.4505C→T；

例如，所述突变的COL14A1蛋白包含氨基酸突变p.Pro1502Leu；

例如，所述引物、探针或抗体或其抗原结合片段是经标记的。

7.一种试剂盒，其包含权利要求6的诊断剂；

优选地，所述试剂盒还包含其他试剂，例如用于PCR的试剂(例如dNTP和聚合酶)，用于提取核酸的试剂，用于检测所述抗体或其抗原结合片段的二抗。

8.权利要求6的诊断剂在制备用于检测COL14A1基因的突变和/或用于诊断PPPK的试剂盒中的用途。

9.用于治疗PPPK的治疗剂，其包含分离的野生型COL14A1基因，或含有所述基因的载体，或野生型COL14A1蛋白，或特异性靶向突变的COL14A1基因的siRNA，或特异性结合突变的COL14A1蛋白的中和性抗体；

例如，所述野生型COL14A1基因具有如SEQ ID NO:1所示的序列；

例如，所述突变的COL14A1基因所包含的突变位于COL14A1基因的外显子，优选第37个外显子，更优选地位于：c.4505，更优选地，所述突变是c.4505C→T；

例如，所述突变的COL14A1蛋白包含氨基酸突变p.Pro1502Leu。

10.一种药物组合物，其包含权利要求9的治疗剂，和药学上可接受的载体和/或赋形剂。