[发明专利]一种羧酸酯酶的活性和羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法有效
| 申请号： | 201210282674.6 | 申请日： | 2012-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN102788776A | 公开（公告）日： | 2012-11-21 |
| 发明（设计）人： | 于聪;廖冬丽;陈健;周会鹏 | 申请（专利权）人： | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 长春菁华专利商标代理事务所 22210 | 代理人： | 陶尊新 |
| 地址： | 130022 吉林*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 羧酸 活性 抑制剂 检测 方法 | ||
1.一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤一：将底物分子和不同浓度羧酸酯酶反应，得到水解产物；
步骤二：将步骤一得到的水解产物、重金属盐溶液、聚阴离子溶液和带正电荷的小分子探针溶液混合，对羧酸酯酶的活性进行荧光检测。
2.根据权利要求1所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的羧酸酯酶为胆碱酯酶或脂肪酶。
3.根据权利要求1所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的底物分子为硫代乙酰胆碱。
4.根据权利要求1所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的步骤一中水解反应体系为：400μL总体系,包括浓度为6.875mM pH值为7.4的Tris-HAc缓冲溶液，浓度为0.06875mM底物分子，0-0.0004U/μL的羧酸酯酶，余量为无菌水。
5.根据权利要求1所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的聚阴离子为聚乙烯磺酸钠或单链DNA。
6.根据权利要求1所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，带正电荷的小分子探针为3,4,9,10-四-（4-三甲基胺丁基氧-羰基）-苝，其结构式为：
7.根据权利要求1所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的检测体系为：550μL总体系,包括400μL水解反应体系，浓度为100μM重金属盐，浓度为60μM聚阴离子，浓度为100μM小分子探针，余量为无菌水。
8.根据权利要求1所述的一种羧酸酯酶的活性的检测方法，其特征在于，所述的荧光检测条件为：442nm荧光激发，460-650nm荧光检测。
9.一种羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤一：将不同浓度的羧酸酯酶抑制剂和羧酸酯酶混合，再和底物分子反应，得到水解产物；
步骤二：将步骤一得到的水解产物、重金属盐溶液、聚阴离子溶液和带正电荷的小分子探针溶液混合，对羧酸酯酶抑制剂的活性进行荧光检测。
10.根据权利要求9所述的一种羧酸酯酶抑制剂的活性的检测方法，其特征在于，带正电荷的小分子探针为3,4,9,10-四-（4-三甲基胺丁基氧-羰基）-苝，其结构式为：
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