[发明专利]羧甲基精氨酸的免疫测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及羧甲基精氨酸的免疫测定方法。

背景技术

AGEs(晚期糖化终末产物，Advanced Glycation end-products)是美拉德反应的后期反应中生成的物质，其与老化、多种疾病的发病/进展的相关联性正日益清楚。例如，已知：皮肤中AGEs生成、积蓄后，成为皮肤弹性降低、皱纹、松弛及色斑等的原因之一。

N^ω-羧甲基精氨酸(下文中也称为“CMA”)作为AGEs中的一种被人所知。已确认CMA是胶原中特异性生成的AGEs(例如，日本特许3889190号)。因此，提出了下述CMA生成抑制剂，所述抑制剂的目的是通过抑制生物体中CMA的生成来防止由CMA的生成和向胶原的积蓄而导致的老化/疾病(WO2011/004734)。此外，因为糖尿病患者的血清蛋白质中的CMA水平较之同年龄段的健康人的血清蛋白质的CMA水平显著更高，所以期待CMA作为糖尿病中糖化的新诊断标志物的可能性(Odani et al.，Biochemical and Biophysical Research Communications 285，1232-1236(2001))。此外，还期待CMA作为骨质疏松症的标志物的利用可能性。

从CMA被发现以前开始，戊糖素(pentosidine)、羧甲基赖氨酸(下文中称为“CML”)、吡咯素(pyrraline)等的数百种的物质被鉴定为AGEs，并尝试将它们作为抗糖化标志物利用。但是，因为戊糖素、CML并非组织特异性的，因此即使测定它们的血中浓度，也无法确定发生糖化的组织。另一方面，如上文所述，因为CMA对胶原等结缔组织蛋白质来说是特异性的，因此测定CMA得到的值可作为结缔组织蛋白质(特别是胶原)中糖化的指标。因此，提出了特异性识别CMA的抗体及含有所述抗体的用于检测CMA的免疫试剂。

发明内容

本发明涉及对试样中羧甲基精氨酸的测定方法，所述方法包括：用含有尿素的预处理剂处理试样，以及根据免疫学方法测定前述经处理的试样中的羧甲基精氨酸。

附图说明

图1是示出实施例1的结果的一个例子的图；

图2是示出比较例1的结果的一个例子的图；

图3是示出从实施例1和比较例1的结果得到的校正线的一个例子的图。

具体实施方式

使用日本特开2002-243732号公报中公开的抗体等测定试剂，针对含有CMA标准品的样品，通过免疫学方法，进行CMA测定，获得了很好的灵敏度。但是，本发明的发明人们发现了新的问题——在生物体试样(特别是来自血液的试样)的情况下，即使使用上述测定试剂，CMA也基本不被检出。另一方面，作为测定生物体试样中的CMA的其它方法，例如有LC/MS法等，但是该方法中存在下述问题：该方法需要特殊的装置，测定极其复杂。因此，本发明提供了新的CMA测定方法，所述方法能简便地、以良好精度测定CMA。

在一种或多种实施方式中，本发明涉及下述试样中的羧甲基精氨酸的测定方法(下文中也称为“本发明的测定方法”)，所述方法包括：用含有尿素的预处理剂处理试样，以及通过免疫学方法，对前述经处理的试样中的羧甲基精氨酸加以测定。

通过本发明，例如，能够简单且以良好精度测定如生物体试样等的试样中的CMA。

本发明基于下述发现：通过尿素(CO(NH₂)₂)对生物体试样进行预处理之后，通过免疫学方法测定CMA，能够简单且以良好精度测定生物体试样中的CMA。

通过用尿素对生物体试样进行预处理、能用免疫学方法测定生物体试样中的CMA的详细机制尚不清楚，但推定为如下。即，认为生物体试样(特别是血液试样)中的CMA是以与清蛋白等蛋白质结合的状态存在的。因此，认为即使添加特异性识别CMA的抗体，因为CMA基本不能与抗体结合所以基本不被检出，而通过用尿素进行预处理，由于与CMA结合的蛋白质发生了结构变化，或者不再保持CMA与蛋白质的结合等原因，CMA和抗体的反应性提高。但是，本发明不限于通过这些机制进行解释。