[发明专利]血清总IgE测定诊断试剂盒及制备和使用方法

权利要求书

1.一种血清总IgE均相发光免疫测定诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：

(1)6个浓度的IgE标准品：分别是1000IU/ml，500IU/ml，200IU/ml，100IU/ml，50IU/ml和0IU/ml；

(2)生物素标记的鼠抗人IgE单克隆抗体溶液：浓度为0.335-0.67微克/毫升；

(3)包被兔抗人IgE多克隆抗体的受体微球溶液：浓度为5～20微克/毫升；

(4)链霉亲和素标记的供体微球溶液：浓度为20～80微克/毫升。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

所述生物素标记的鼠抗人IgE单克隆抗体溶液：浓度为0.447微克/毫升；

所述包被兔抗人IgE多克隆抗体的受体微球溶液：浓度为10微克/毫升；

所述链霉亲和素标记的供体微球溶液：浓度为50微克/毫升。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括不透明微孔板。

4.一种制备权利要求1-3任一项所述试剂盒的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)配制缓冲液

分别配制0.1M，pH 7.4磷酸盐缓冲盐水溶液；0.1M，pH 7.4磷酸盐缓冲溶液；0.1M，pH 8.0磷酸盐缓冲溶液；0.1M，pH 8.0Tris-HCl缓冲液；

(2)总IgE标准品配制

取IgE纯品，用含20％灭活小牛血清的0.1M pH 7.4磷酸盐缓冲盐水溶液配制成0、50、100、200、500、1000IU/ml的系列标准品溶液各1毫升；

(3)制备包被兔抗人IgE多克隆抗体的受体微球；

(4)配制受体微球工作液

用pH 8.0，0.1M Tris-HCl缓冲液将包被兔抗人IgE多克隆抗体的受体微球稀释到相应浓度；

(5)制备生物素标记的鼠抗人IgE单克隆抗体溶液；

(6)将IgE标准品、生物素标记的鼠抗人IgE单克隆抗体溶液、包被兔抗人IgE多克隆抗体的受体微球溶液、链霉亲和素标记的供体微球溶液组装成试剂盒成品。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：包被兔抗人IgE多克隆抗体的受体微球由如下步骤制备得到：

(1)预处理抗体和含量测定

将欲标记的兔抗人IgE多克隆抗体装入透析袋中，置于0.1M pH 8.0磷酸盐缓冲液透析，透析后用紫外分光光度计测定抗体含量，调整浓度至1-2毫克/毫升；

(2)洗涤微球

取50微升，浓度为20毫克/毫升的受体微球置于1.5毫升离心管中，加入0.1M pH8.0磷酸盐缓冲盐水溶液，离心洗涤1-2次，每次16000rpm 15分钟，弃上清液，待用；

(3)标记

上述离心管内加入0.1毫克兔抗人IgE多克隆抗体，并用0.1M pH 8.0磷酸盐缓冲盐水溶液定容至200微升，再依次加入1.25微升10％吐温20溶液、10微升新鲜配制的400mM氰基硼氢化钠溶液，充分混匀置37℃温箱内反应48小时以上；

(4)封闭

用800mM氢氧化钠溶液配制溶度为65毫克/毫升的羧甲氨基胺溶液；取10微升羧甲氨基胺溶液于标记后的离心管内，置37℃温箱内反应1小时；

(5)洗球

将经步骤(4)处理后的离心管置于离心机内，16000rpm离心15分钟，弃上清液，再加入200微升0.1M，pH 8.0的Tris-HCl溶液，重新悬浮微球；重复离心，再次悬浮至50微升，得所述包被兔抗人IgE多克隆抗体的受体微球。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述生物素标记的鼠抗人IgE单克隆抗体溶液由如下步骤制备得到：

将活化的生物素溶于二甲基甲酰胺中，按照生物素与鼠抗人IgE单克隆抗体的摩尔比为20∶1的比例将二者混合反应，将反应后的液体用0.1M，pH 7.4磷酸盐缓冲盐水溶液进行透析，得所述生物素标记的鼠抗人IgE单克隆抗体溶液。