[发明专利]一种亮斑扁角水虻抗菌肽及制备方法和应用

权利要求书

1.一种分离的抗菌肽基因，其序列为SEQ ID NO.1所示。

2.一种分离的抗菌肽基因，其序列为SEQ ID NO.2所示。

3.一种权利要求1或2所述基因编码的抗菌肽，其序列为SEQ ID NO.3所示。

4.一种权利要求3所述的抗菌肽的制备方法，其步骤为：

A．提取亮斑扁角水虻的总RNA或mRNA为模板，通过反转录得到亮斑扁角水虻的cDNA第一链；

B．查阅抗菌肽数据库，根据双翅目昆虫的抗菌肽进行分析各类抗菌肽的保守区域，利用Primer5.0来设计简并引物，设计了6对引物；

C．以步骤A中的cDNA第一链为模板，以设计的简并引物为引物进行基因扩增筛查；

D．琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，将得到目的大小条带的PCR产物进行回收；

E．酶切步骤D得到的序列和真核表达载体pPICZαA，并构建重组表达载体pPICZαA-Stomoxyn ZH1；

F．将步骤E中得到的重组表达载体转化大肠杆菌宿主细胞进行大量克隆，再将克隆后的重组表达载体电转化至酵母宿主细胞GS115形成表达抗菌肽的重组菌株；

G．将步骤F中得到的重组菌株在30℃条件下用1%的甲醇诱导培养2-3 d获得培养物；

H．离心步骤F中得到培养物，分离纯化上清中表达抗菌肽。

5.一种权利要求3所述的抗菌肽在制备治疗或预防医学抗菌感染药物中的应用。

6.一种权利要求3所述的抗菌肽在制备商业动物抗菌饲料添加剂中的应用。

7.一种权利要求3所述的抗菌肽在制备治疗或预防农业植物病害的生物农药中的应用。