[发明专利]一种快速测定含硒蛋白中硒的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，属于分析化学领域。

背景技术

硒是人和动物体必需的微量元素，具有多种生物学功能，如具有抗氧化、抗癌、防衰老、提高人体免疫力、保护心脑血管等作用，它的生物学功能主要是以硒蛋白表现的。已发现的硒蛋白大多数是具有重要作用的酶，又称之为硒酶。目前已有大量研究表明人体40多种疾病与硒的营养状况有密切的关系。

因此，对硒蛋白的研究已成为近年来的热点研究课题。硒蛋白的纯化过程中硒含量的测定有多种方法，如利用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS），电感耦合等离子体发射光谱（ICP-AES）对纯化的蛋白进行硒含量的测定。这些方法虽然方法快速，但仪器设备的费用昂贵，电感耦合等离子体质谱或发射光谱的仪器费用是原子荧光的3倍以上，载气的使用费用是原子荧光的50倍以上，这些设备昂贵不利于测试的普及，寻求一种设备简单，精度较高的方法十分有必要。

发明内容

本发明的目的是：提供一种简便，能精确快速测定含硒蛋白中硒的方法。

为达上述目的，本发明借助原子荧光光谱（AFS）对提取蛋白中的硒进行定量分析。

本发明的技术方案是：一种快速测定含硒蛋白中硒的方法，其特征在于它由如下步骤组成：1. 提取蛋白的处理，2. 原子荧光光谱法测定硒含量，3. 结果计算。

下面对上述技术方案进行进一步解释：

1、提取蛋白的处理：本发明中所涉及的蛋白为通过不同层析方法获得的蛋白，因为纯化过程中收集的蛋白组分往往较少，有时仅为几十到几百微升微升，除了进行硒含量的测定，还需进行进一步的纯化或其他生物学功能的测定。而常规的混酸消解往往需要毫升量级体积的样品，所以纯化提取的蛋白不适合用常规的混酸消解后进行测定。将层析纯化收集的蛋白取部分样品加入一定体积的浓盐酸（1:20~1:40，v/v）沸水浴中保持0.5~1h，冷却后纯水定容至5 ml，利用原子荧光进行测定。同时做试样空白。

2、原子荧光光谱法测定硒：取硒标准溶液（1000 μg/ml）（国家标准物质中心）逐级稀释，再配置成1 ppb，2 ppb，5 ppb，8 ppb，10 ppb几个浓度系列。作为标准曲线的绘制。线性关系达到0.999以上方可进行样品检测。测定的仪器参考条件条件为：负高压：270 V；灯电流：80 mA；原子化温度：800 ℃；炉高：8 mm；载气流速：400 mL/min；屏蔽气流速：800 mL/min；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；延迟时间：1 s；读数时间：7 s。设定好仪器条件，点火预热10 min~20 min待仪器稳定后开始测量。先测定标准系列，绘制标准曲线。再进行试样测量。

3.  结果计算：分别测定试样空白和试样，试样测定结果按下式计算试样中硒的含量：

X=(C-C0)×V1/V2

式中：

X—试样中硒的含量，单位为微克每升（μg/L）；

C—试样测定的浓度，单位为微克每升（μg/L）；

C0—试样空白测定浓度，单位为微克每升（μg/L）；

V1—试样定容体积，单位为毫升（mL）；

V2—试样取样体积，单位为毫升（mL）。

本发明能提供一种操作简便，精确度高RSD<2%，加标回收率为92%~100%，成本低廉的测定硒的方法。本发明是对提取的蛋白进行简单的处理，利用原子荧光（AFS）直接测定硒含量，方法简便，精确度高，成本低廉。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明和效果，但不影响发明的保护范围。

实施例一：

取层析纯化收集的蛋白50 ul，加入1ml浓盐酸沸水浴保持10 min，冷却后定容至5 ml利用原子荧光进行测定，同时做试样空白，加标回收实验。

取硒标准溶液（1000 μg/ml）（国家标准物质中心）逐级稀释，再配置成0.1 ppb，0.2 ppb，0.5 ppb，0.8 ppb，1.0 ppb几个浓度系列。作为标准曲线的绘制。线性关系达到0.999以上方可进行样品检测。测定的仪器参考条件条件为：负高压：270 V；灯电流：80 mA；原子化温度：800 ℃；炉高：8 mm；载气流速：400 mL/min；屏蔽气流速：800 mL/min；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；延迟时间：1 s；读数时间：7 s。设定好仪器条件，点火预热10 min~20 min待仪器稳定后开始测量。先测定标准系列，绘制标准曲线，再进行试样测量。