[发明专利]胶体金免疫层析检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，特别是涉及一种胶体金免疫层析检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

20世纪70年代，Faulk和Taylor首次将胶体金作为示踪物用于免疫电镜检测技术，后来该技术发展成了多种分析方法，如免疫渗滤试验和免疫层析试验等。胶体金免疫层析技术已经成为快速诊断的一个重要发展方向，随着纳米技术和单克隆抗体技术的完善、成熟，该技术也得到了迅速的发展，并在多个领域得到广泛地应用，如临床医学、农业应用、环境检测、兽医学应用、食品安全等。

目前虽然某些胶体金检测产品的灵敏度很高，达到使用要求，但是还是有很多产品因为灵敏度原因无法投入应用，使胶体金免疫层析技术应用受到限制。无疑灵敏度的提高能拓宽胶体金免疫层析检测法的应用范围。随着免疫分析技术的发展，人们对产品的性能要求也越来越高，高灵敏度也是胶体金免疫层析技术发展的一个趋势。

目前报道中常见的是免疫金银染色法加强技术对胶体金免疫层析试纸条检测信号进行加强，胶体金银染色法加强技术原理是利用胶体金免疫层析试纸条显色条带(T/C)中的金颗粒在还原剂(对苯二酚、抗坏血酸等)作用下可将银离子还原成银颗粒，被还原的银颗粒在金颗粒表面形成一层黑或灰色层“银壳”。但是该法使用的化学试剂性质极不稳定，不适合长期保存；而且经加强之后试纸条背景干扰大，影响结果判断；放大效果一般。

中国检验检疫科学研究院《胶体金免疫层析法的增敏检测方法及应用》(公开号CN101470114A)，该专利是关于采用金扩增技术对免疫层析法检测信号进行加强，但该专利中加强所需步骤繁琐、且需要洗涤过程，浪费时间和精力。

发明内容

基于此，本发明提供了一种胶体金免疫层析检测试剂盒，该试剂盒结构特殊，能加强胶体金免疫层析大分子检测产品信号。

一种胶体金免疫层析检测试剂盒，包括具有盒底和盒盖的盒体，盒底包括试纸条，所述试纸条由样品垫、胶体金颗粒标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，还包括设置在所述盒盖内表面的加强液垫，当合上盒盖时，所述加强液垫位于所述胶体金颗粒标记垫和硝酸纤维素膜之间。

在其中一个实施例中，所述盒盖设置有加强孔，所述加强孔对应所述加强液垫。

在其中一个实施例中，所述盒盖设置有观察孔，所述观察孔对应所述硝酸纤维素膜。

在其中一个实施例中，所述加强液垫的长度为1.5～2.5cm，宽度为2mm～5mm。

在其中一个实施例中，所述加强液垫为玻璃纤维或聚酯纤维。

本发明的胶体金免疫层析试纸盒在检测血清、尿液、分泌物时，对样品进行常规处理。待试纸条胶体金标记抗体层析完全，合上试纸盒的盒盖，从加强孔将加强液(由A液和B液混合而成，所述A液为质量百分浓度为0.2～1％的氯金酸溶液；所述B液为10mM～30mM的盐酸羟胺或质量百分浓度为0.3-0.9％的抗坏血酸溶液)加入加强液垫中，通过加强液垫可将加强液导入试纸条，加强液在加强液垫上层析至T、C线，对检测信号进行加强。

本发明还提供了上述胶体金免疫层析检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备胶体金溶液

将100ml氯金酸溶液加热至沸腾后，迅速加入0.8-1.5ml质量百分含量为1％的柠檬酸三钠溶液，待颜色稳定后继续煮沸5-20min，冷却，4℃保存备用；

(2)制备胶体金标记抗体

调节胶体金溶液至最佳pH，按最适标记蛋白量缓慢向胶体金溶液中添加标记抗体，磁力搅拌器混合均匀后，加入BSA溶液，使BSA终浓度为0.5％～2％，低速离心20-40min，再高速离心20-40min，加入含1％BSA的10mM的PB溶液复溶，高速离心重复2～3次，最终用含1％BSA的10mM的PB液复溶至约为原体积的1/10；即得胶体金标记抗体；

(3)制备试剂盒

将样品垫、胶体金颗粒标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上制备试纸条，所述胶体金颗粒标记垫上包被有与待检物质可以结合的胶体金标记抗体，所述硝酸纤维膜上包被有检测线和质控线；

在试剂盒的盒盖的内表面设置一个加强液垫，当合上盒盖时，所述加强液垫4位于所述胶体金颗粒标记垫和硝酸纤维素膜之间；在所述盒盖上表面设置有加强孔，所述加强孔对应所述加强液垫。