[发明专利]一种人源化抗人白细胞介素1 β单克隆抗体及其制备与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种人源化抗人白细胞介素1 β单克隆抗体及其制备与应用。

背景技术

人白细胞介素1β（hIL-1β）是一种由单核细胞和巨噬细胞等不同类型细胞分泌的促炎细胞因子，它主要通过激发如促肾上腺皮质激素、血小板因子-4、前列腺素E2、白细胞介素-6和白细胞介素-8等其他炎症调节因子来引发一系列的生物学效应。hIL-1β可以通过激活任何类型细胞上的hIL-1受体激发局部或全身的炎症反应。

hIL-1家族细胞因子与许多疾病相关（Dinarello CA,N Engl J Med(2009)360:2467–70），家族成员包括hIL-1α，hIL-1β和hIL-1Ra，其中以hIL-1β为主，是一种在炎症反应中起关键作用的细胞因子。在中枢神经系统，hIL-1与发热、食欲不振、慢波睡眠有关；在脉管系统，hIL-1引起血管扩张，诱导粘附分子和趋化因子表达，促进中性粒细胞外渗；在肝脏中，hIL-1诱发急性时相蛋白合成；在结缔组织中，hIL-1可致骨吸收和胶原酶合成，促进成纤维细胞、角质细胞增殖和组织重建。另外，hIL-1能刺激造血系统、激活免疫系统，还能抗中性粒细胞凋亡，并在骨组织、上皮组织中发挥作用。

hIL-1的上述活性是对感染或损伤作出的有益反应，但hIL-1的异常调控则对机体产生不利影响。病毒、细菌、真菌、寄生虫感染病人，痛风病人，Alzheimer病、自身免疫紊乱、血液透析、心肌梗塞、移植物抗宿主病人，创伤病人及实体肿瘤、白血病、动脉粥样硬化、低血压病人中，hIL-1表达量明显高于正常水平。hIL-1在类风湿性关节炎（特别是慢性风湿性关节炎）、非感染性肝炎、胰腺炎等炎症中也扮演关键角色。hIL-1还牵涉到II型糖尿病中葡萄糖毒性的发病机理的炎症过程（Maedler等人，J Clin Invest（2002）110:851-860），并在胰岛β细胞凋亡途径中具有明显意义（Donath等人，J Mol med（2003）81:455-470）。

近年来，国际上对直接抑制hIL-1β的抑制剂作为治疗药物进行了大量研究，例如受体拮抗剂、DNA合成抑制剂、单克隆抗体等，被用于治疗如急性痛风、类风湿关节炎、II型糖尿病和非感染性葡萄膜炎等相关疾病，其中，单克隆抗体的应用前景最为广阔，具有超过了其他潜在治疗方法的优点。单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制，并且来源容易。这些优点使它一问世就受到高度重视，并广泛应用于生物学和医学研究领域。然而，动物来源的单克隆抗体作为外源性的抗原，多次反复的注射后能促使机体发生免疫应答，产生相应的抗抗体，产生排斥现象，限制了单抗技术的应用和发展。

目前避免或减少免疫反应的主要途径是将单克隆抗体人源化，研制人源化单克隆抗体。但目前这类抗体往往会遇到亲和力下降、活性不高、产量低等问题。因此，在本领域有必要研发新型的抗hIL-1β的单克隆抗体药物，以期为相关疾病的治疗提供更广阔的空间。

发明内容

本发明提供了一种新型的人源化抗人白细胞介素1 β（hIL-1β）单克隆抗体及其制备与应用。

本发明一方面提供了一种新型的人源化抗人白细胞介素1 β（hIL-1β）单克隆抗体，该抗体的轻链具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，重链具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

本发明的hIL-1β单克隆抗体是通过将兔单克隆抗体进行人源化而得到的，对抗原具有很高的亲和力。本发明的hIL-1β单克隆抗体在人宿主内的免疫原性大大低于所述兔源亲本抗体。

抗体的人源化方法是通过改变亲本抗体构架区的氨基酸序列，使人源化抗体的构架区与人抗体的构架区在序列上更为接近。与未经修饰的亲本抗体相比，人源化的抗体在宿主体内具有较弱的免疫原性，同时保留与抗原的高亲和力。具体方法可参考2003年8月3日在中国国家知识产权局递交的申请号为03827110.9 的美国专利申请案“兔单克隆抗体的人源化方法”中描述的方法。抗体的人源化方法可包括下列步骤：

1）兔单克隆抗体的获得