[发明专利]一种复方丹参浸膏中低聚四糖的分离纯化方法

权利要求书

1.一种复方丹参浸膏中低聚四糖的分离纯化方法，包括如下步骤：

（1）复方丹参浸膏总糖提取物的制备；

（2）复方丹参浸膏总糖提取物过聚丙烯酰胺凝胶层析柱；

（3）低聚四糖成分的收集。

2.如权利要求1所述的方法，其中步骤（1）所述复方丹参浸膏总糖提取物的制备方法为：

复方丹参浸膏加水超声溶解，上至已处理好的固相萃取柱，流速为0.5-1.0mL/min，再用水分次洗涤，收集上样液和洗涤流出液，蒸干，得复方丹参浸膏总糖提取物。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述固相萃取柱采用Cleanert PS-SPE萃取柱，使用前经过处理，处理方法为：将固相萃取柱用甲醇冲洗，之后再用水冲洗。

4.如权利要求1所述的方法，其中步骤（2）所述过聚丙烯酰胺凝胶层析柱是将得到的复方丹参浸膏总糖提取物用超纯水溶解，上样至已处理好的层析柱，层析柱的柱温为35-45，用超纯水进行洗脱，收集流出量相当于0.55-0.65柱体积时的流份。

5.如权利要求1所述的方法，其中，聚丙烯酰胺凝胶层析柱用以下方法得到：

称取聚丙烯酰胺凝胶，倒入超纯水中，在室温下润涨12小以上真空脱气，装柱，装柱高度为100-120cm，再用2~3倍柱体积的超纯水以恒定的流速平衡层析柱。

6.如权利要求4所述的方法，其中层析柱的柱温为40℃。

7.如权利要求4所述的方法，其中所述上样量为0.075-0.125g复方丹参浸膏总糖提取物/100克聚丙烯酰胺凝胶。

8.如权利要求4所述的方法，其中所述层析柱的洗脱流速为0.0184-0.0367柱体积/小时。

9.如权利要求1所述的方法，其中步骤（3）所述的低聚四糖成分的收集方法为：用HPLC方法对洗脱液进行检测，收集保留时间为30.5min±0.2min的洗脱液，蒸干，得到洗脱物。

10.如权利要求9所述的方法，所述检测方法为：

采用HPLC-ELSD法，色谱条件：采用PrevailTM Carbohydrate ES色谱柱，以乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度设置见表，流速为0.8mL/min，柱温30℃；采用WATERS 2420ELSD检测器，参数设置为增益10，气压25psi，漂移管60℃，Neb heater为60%。