[发明专利]一种肌红蛋白检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人肌红蛋白的检测试剂盒。

背景技术

肌红蛋白存在于肌肉中，心肌中含量特别丰富，肌红蛋白是目前人类研究最多的蛋白质之一。肌红蛋白是哺乳动物肌肉中运输氧的蛋白质。它由一条多肽链构成，有153个氨基酸残基和一个血红素辅基，分子量为17 800。具有在肌细胞内转运和贮存氧的功能。人体心肌、骨骼肌内含有大量肌红蛋白，正常人的血液中很少，主要由肾脏代谢并排泄。肌红蛋白增高见于急性心肌梗死早期、急性肌损伤、肌营养不良、肌萎缩、多发性肌炎、急性或慢性肾功能衰竭、严重充血性心力衰竭和长期休克等。

肌红蛋白更是检测急性心肌梗死( AMI) 的早期指标，在AMI 后1-2小时 ，在患者血清中的浓度即迅速增加，6-9 h 达到高峰。一旦患者诊断为AMI且已进行相应治疗，主要的是进一步评价患者在住院期间是否有并发症及再梗死。此时用肌钙蛋白可能是不适宜的，因为疾病发作后肌钙蛋白的长期释放模式可能掩饰发生额外新的损伤。而肌红蛋白在发作后第一天内即返回到基线浓度，当有再梗死时，则又迅速上升，形成多峰现象，可以反映局部缺血心肌周期性自发的冠脉再梗塞和再灌注。

肌红蛋白测定方法很多，其敏感性和特异性不同。分光光度法是1963年Reynafarje等首先建立，将待测肌红蛋白转变为CO化合物，测其中两个最大吸收峰(538nm,568nm)，计算肌红蛋白含量，但敏感度较差，故仅适用于含量较高标本的检测。用HPLC法测定血清或尿肌红蛋白最低检测限为2mg/L，线性范围为20~3000mg/L。但需特殊设备，不适合中、小型医院开展。超滤法在测定肌红蛋白回收率时出现高度差异，而免疫检测法不受尿中其它蛋白质或颗粒性物质的影响，并且能准确地测定尿中肌红蛋白含量。用超滤-浸渍片法定性地检测尿肌红蛋白，对肌红蛋白继发肾功能障碍的患者可能造成误诊，特别是在尿肌红蛋白＜60000μg/L时，上述方法均不适用于临床常规应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种肌红蛋白的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。

本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。

为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为：

试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；

试剂R2：缓冲液、结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。

本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下：

（a）按下列比例配制好试剂：

试剂R1：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

聚乙二醇        5-10 mmol/L

叠氮钠          1-5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子   3.5-5%（v/v）

吐温-20         1-5mmol/L

叠氮钠          0.5-3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L

（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；

（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；

（d）根据吸光度变化值计算出样本中肌红蛋白的浓度。

具体实施方式

下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。

实施例1：

本发明的试剂盒举例是双试剂，其中：

试剂R1：

Tris缓冲液      200mmol/L

聚乙二醇        8 mmol/L

叠氮钠          5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200mmol/L

结合有肌红蛋白单克隆抗体的乳胶粒子   5%（v/v）

吐温-20         5mmol/L

叠氮钠          3 mmol/L