[发明专利]一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒。

背景技术

心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）是分子量为l4～15kd的可溶性胞浆蛋白,主要分布于心肌组织中，约占心肌细胞可溶性蛋白的4％ ～8％，在骨骼肌、肾小管、脑组织、乳腺、胎盘组织中也有少量分布。H-FABP是由132个氨基酸残基组成酸性蛋白质，其等电点(PI)为5，其基因定位于1号染色体。

在正常情况下，长链脂肪酸是心肌细胞的主要能量来源。H—FABP作为脂肪酸的载体蛋白与心肌内的长链脂肪酸相结合，将其从细胞质膜向线粒体运输，从而进入能量代谢体系中氧化分解，生成三磷酸腺苷，为心肌收缩提供能量。此外，还参与旁路信号传导：如通过脂肪酸信号易位至过氧化物酶体增生物激活受体间接调控基因表达，并被认为当心肌缺血造成局部长链脂肪酸聚集时，H-FABP对心肌有保护作用。

生理条件下，血浆和尿中不含H-FABP或含量很少，正常人血液中可以检测到低浓度的H-FABP。性别、年龄和昼夜节律均可引起H-FABP含量的变化如男性肌肉比例高于女性，因此男性血浆H-FABP浓度高于女性；血中H-FABP主要由肾脏清除，血浆H-FABP浓度随年龄升高。

H-FABP具有很强的组织特异性，在心肌损伤后被迅速释放入血，在急性心肌梗死(AMI)发病1 小时开始升高，快速达峰值，可以作为AMI等心肌损伤早期检测的生化标志物。

AMI后再梗塞是心肌梗死的严重并发症，但目前在临床工作中尚缺乏有效的监测手段。常用的生物标志物在血中的浓度要持续数天才恢复至正常，不能早期发现AMI后再梗塞。H-FABP在AMI发作3h内超过阙值，达峰值时间短，并在12～24h内由肾脏完全排除回落至基线。AMI发生10小时后通过连续检测血H-FABP可以早期发现心肌再梗。由于H-FABP独特的血液动力学特征，早期、连续检测H-FABP浓度有利于及早发现AMI再梗，采取及时有效的治疗措施，改善患者的预后。

H-FABP是一种相对稳定的蛋白质，目前已有多种定性和定量的检测方法可用。最早是Ockner于1974年提出的放射免疫法，通过测定免疫沉淀中放射性比活度来定量检测FABP。后又研制出夹心ELISA法、微粒子增强的免疫比浊测定、免疫传感器法等测定方法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验。

发明内容

本发明的目的是提供一种心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。

本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。

为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为：

试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；

试剂R2：缓冲液、结合有心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。

本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下：

（a）按下列比例配制好试剂：

试剂R1：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

聚乙二醇        5-10 mmol/L

叠氮钠          1-5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

结合有心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的乳胶粒子   3.5-5%（v/v）

吐温-20         1-5mmol/L

叠氮钠          0.5-3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；

（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；

（d）根据吸光度变化值计算出样本中心型脂肪酸结合蛋白的浓度。

具体实施方式

下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。

实施例1：

本发明的试剂盒举例是双试剂，其中：

试剂R1：

Tris缓冲液      200mmol/L

聚乙二醇        8 mmol/L